| 主权项 |
一种制造RNA复本的方法，该方法包括：提供一第一固态支托，该支托上系已连接具有含一启动子序列以及一标的结合序列之寡核苷酸；黏合(annealing)一包括有RNAs之样品至该固态支托上；利用一RNA-引导(RNA-directed)之DNA聚合酶，延长该已连接于该第一固态支托之寡核苷酸，以制造该等RNAs之DNA复本；合成互补该DNA复本之DNA单股，以制造一包括该启动子序列之双股模板；结合一包括有一标签序列之接合子(adaptor)至该双股模板；以及利用一可辨识该启动子区域之RNA聚合酶，转录该双股模板以制造第一股RNA复本，其中，该固态支托系选自由一下列物质所组成之群组：一针头(pin)、一阵列、一具有一多试样载具之表面、玻璃、塑胶薄膜与位于一离心杯(spin-cup)上之薄膜。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该双股模板系嵌合入该已连接之寡核苷酸中，并藉由该已连接之寡核苷酸固定在该固态支托上。如申请专利范围第1项所述之方法，其更包括将一第一股RNA复本黏合至已固定之第二寡核苷酸，其包括一第二启动子序列以及一互补于该标签序列之序列。如申请专利范围第3项所述之方法，其更包括：利用一RNA-引导之DNA聚合酶，以延长该已固定之第二寡核苷酸，建构该等RNAs之DNA复本；合成互补于该等DNA复本之DNA单股，以制造包括该第二启动子序列之第二模板；以及利用一可辨认该第二双股启动子区域之RNA聚合酶，以转录该互补单股，制造第二股RNA复本。如申请专利范围第4项所述之方法，其中该已固定之第二寡核苷酸系固定于一第二固态支托。如申请专利范围第4项所述之方法，其中该已固定之第二寡核苷酸系固定于该第一固态支托。如申请专利范围第4项所述之方法，其更包括回收(recovering)一双股DNA分子群(pool)其系得自该第一股以及第二股RNA复本之杂合反应(hybridization)。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该第一固态支托系一针头(pin)。如申请专利范围第8项所述之方法，其中该针头系连接于一包括有其他连接针头之基座(base)，其中该基座所包含之针头之装配状态使其可被放置在分离之反应混合物中。如申请专利范围第8项所述之方法，其中该针头系在使用该方法时在多个容器间转移，每一容器包括不同的反应之反应剂。如申请专利范围第4项所述之方法，其中该第二单股RNA复本系用以制造额外之第一股RNA复本。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该方法系实质上等温或在低于40℃之温度下进行。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该样品核酸包括基因体DNA(genomic DNA)。如申请专利范围第1项所述之方法，其中该样品核酸包括cDNA。如申请专利范围第1项所述之方法，其中更包括转译(translate)该转录后之RNA。一种RNA复制与倍增之方法，包括：提供一第一固态支托，该支托上系已连接具有含一启动子序列以及一标的股；黏合一样品核酸单股至一已结合该标的股之第一寡核苷酸；延长该标的股之3端，以形成一第一寡核苷酸-单股复合物(complex)；利用一第一RNA聚合酶转录该第一寡核苷酸-单股复合物，以产生一第一RNA单股；黏合该第一RNA单股至一结合至一第一RNA单股之第二寡核苷酸；反转录该第一RNA单股，以产生一第一复本单股(copy strand)；使该第一复本单股成为双股，以生成一第二寡核苷酸-复本复合物；以及转录该第二寡核苷酸-复本复合物，其中该第一寡核苷酸包括一特定地被一第一RNA聚合酶所辨识之启动子区域，与一结合至该标的股之3端之标的结合区域，以及该第二寡核苷酸包括一特定地被一第二RNA聚合酶所辨识之启动子区域，与一结合至该第一RNA单股之3端之标的结合区域。如申请专利范围第16项所述之方法，其中该方法系实质上等温或在低于40℃之温度下进行。如申请专利范围第16项所述之方法，其中该样品核酸包括基因体DNA(genomic DNA)。如申请专利范围第16项所述之方法，其中该样品核酸包括cDNA。如申请专利范围第16项所述之方法，其中更包括在转录后保存该支托至少12小时；并重复进行转录。如申请专利范围第16项所述之方法，其中更包括转译(translate)该转录后之RNA。如申请专利范围第16项所述之方法，其中更包括将转录所得之RNA定序。如申请专利范围第16项所述之方法，其中更包括从转录所得之RNA制造DNA复本；以及在一载体核酸中复制该DNA复本。一种制造RNA复本之方法，包括：提供一具有寡核苷酸之固态支托，其中该寡核苷酸包含一T7启动子区域，一多胸腺嘧啶尾段(homopolymeric T tract)，以及一终端腺嘌呤、鸟粪嘌呤或胞嘧啶；黏合一含RNAs之样品至该固态支托；利用一RNA-引导(RNA-directed)之DNA聚合酶，延展该固态支托上之该寡核苷酸，以建构该RNAs之DNA复本；合成互补于该DNA复本之单股DNA；以及利用一可辨识该启动子区域之RNA聚合酶转录该互补之单股DNA，以制造RNA复本；其中，该固态支托系由玻璃构成，或一多孔盘之一孔之表面。如申请专利范围第24项所述之方法，其中该RNAs包括mRNAs。如申请专利范围第25项所述之方法，其中该mRNAs系取自一哺乳类动物组织。如申请专利范围第25项所述之方法，其中该mRNAs之来源系少于100个细胞。如申请专利范围第25项所述之方法，其中该mRNAs之来源系少于10个细胞。如申请专利范围第25项所述之方法，其中该mRNAs系少于10ng。如申请专利范围第26项所述之方法，其中该组织系正常组织。如申请专利范围第26项所述之方法，其中该组织系肿瘤组织(tumorous)或转移性组织(metastatic)。如申请专利范围第24项所述之方法，其中更包括在转录前保存该固态支托至少48小时。如申请专利范围第24项所述之方法，其中该连接之寡核苷酸系相同的。如申请专利范围第24项所述之方法，其中该连接之寡核苷酸系以共价(covalently)键结方式连接。如申请专利范围第24项所述之方法，其中该连接之寡核苷酸系以非共价(non-covalently)键结方式连接。如申请专利范围第24项所述之方法，其中该RNA复本系已标定(labeled)。如申请专利范围第24项所述之方法，其中更包括杂合一(标定)探针至该固态支托。如申请专利范围第24项所述之方法，其中该连接之寡核苷酸系以其5端连接。 |
