一种多种性传播病原体同步检测的PCR方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种同步快速检测五种性传播疾病病原体(淋球菌(NG)、人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU))的单管多重PCR的方法及试剂盒，其特点是通过合理设计引物，优化引物浓度组合及PCR条件，在同一个反应管中和同一个热循环条件下，对五种病原体同时进行扩增，并通过凝胶电泳分离和检侧。该发明除具有经典PCR的灵敏度、快速、简便等特点以外，主要是实现了五种病原体的同步检测，成本更低，能用于开发相关试剂盒，用于临床诊断和流行病学调查和控制。

主权项

1.一种多种性传播疾病病原体同步检测的PCR方法及试剂盒，该方法包括以下试剂及步骤：A.设计用于同步扩增五种病原体NG、UU、CT、MG和MH的引物，各引物为针对相应病原体的高度保守基因，引物的退火温度为56℃～64℃，引物两两之间无三碱基以上之互补，PCR扩增产物两两长度之差大于40～50bp；B.五种病原体NG、UU、CT、MG和MH的引物序列为：C.五种病原体NG、UU、CT、MG和MH基因同步检测的PCR，反应体积25ul，Taq酶1.0U，缓冲液：lx GC，Mg2+：3.0mmol/L，dNTPs：400umol/L，引物微摩尔浓度(umol/L)组合为：  NG   MH   MG   CT   UU   NP1/NP2   MHP1/MHP2   MP1/MP2   CP1/CP2   UP1/UP2   0.5   0.4   0.4   0.4   1.5 反应在热循环仪上进行，热循环参数为：94℃预变性3min，然后94℃1min、60℃1min、72℃2min 35个循环，最后72℃延伸5minD.扩增后，取10μl PCR产物和0.8μl Generuler(深圳晶美)在1×TEB缓冲液、5-6V/cm条件下跑2％琼脂糖凝胶电泳40min，EB染色后于UVP凝胶成像仪(UVP Inc，美国)下观察结果。