一种基于ORF2抗原功能区的检测猪圆环病的方法

摘要

一种基于ORF2抗原功能区的检测猪圆环病的方法，以PCV2 ORF2上的特定氨基酸区段(113-147aa)为目标，将其与GST融合表达得到GST-ORF2-E融合蛋白，利用亲和层析柱将融合蛋白纯化后作为抗原包被ELISA 96孔板，建立间接ELISA方法，本方法中选择的特定氨基酸区段是PCV2 ORF2上抗原性较高的区段，将其作为ELISA包被抗原，提高了传统PCV2 ELISA方法的灵敏度和特异性，与常规应用的免疫荧光检测方法相比，该法的特异性和敏感性分别为87.7％和93.57％。由于ORF2在PCV1和PCV2间无抗原交叉，能够用于鉴别诊断PCV1和PCV2的感染。用该方法可以鉴别PCV1和PCV2感染的动物。

主权项

一种基于ORF2抗原功能区的检测猪圆环病的方法，其特征在于包括如下步骤：设计特异性引物，扩增获得ORF2上的氨基酸区段113‑147aa的基因片段；将目的基因片段克隆进pGEX‑4T‑1中，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达GST‑ORF2‑E融合蛋白，并纯化；以纯化蛋白作为抗原包被96孔ELISA板；加入待检血清；加入HRP标记的二抗，即HRP标记抗猪IgG；加入盐酸邻苯二胺(OPD)快速显色液进行显色；测定490nm的光密度(OD490)并判读结果。