用于核酸序列检测的方法和试剂盒

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了用于检测样品中所含有的多核苷酸分析物中靶序列存在情况的方法和试剂盒。在实施本发明时，在使发现物与探针有效形成双链复合物的条件下将样品与靶标探针混合，所述靶标探针具有能与所述靶序列杂交的序列，使该复合物中的探针在存在聚合酶和四种可能的核苷三磷酸中选定的一至三种的情况下发生反应，以在该探针的3′末端加入选定的一个或多个靶标指导的核苷酸碱基，从而产生经修饰探针。使经修饰探针与检测探针杂交，两种探针连接在以其形成两探针连接产物，并检测连接产物的存在情况。

主权项

用于检测样品中所含有的多核苷酸分析物中靶序列存在情况的方法，该方法包括以下步骤：(a)在有效形成分析物与探针的双链复合物的条件下，将样品与靶标探针混合，所述靶标探针含有能与靶序列杂交的序列；(b)在存在聚合酶及四种可能核苷三磷酸中选定的一至三种的情况下使该复合物中的探针发生反应，从而向该探针的3′末端添加一个或多个由靶标指导的核苷酸碱基，以产生经修饰探针；(c)使所述经修饰探针与检测探针杂交，其中该检测探针不与靶标杂交，且这两种探针中的至少一种具有粘末端，所述粘末端具有与另一探针3′末端或5′末端的单链部分互补的单链部分；(d)通过该反应将所述两种探针连接起来，以形成两探针连接产物；和(e)检测该连接产物的存在情况。