主权项 |
一种棉毛鹿茸草的离体培养法,其特征是依次包括以下步骤:1)、取无病斑、生长健壮的绵毛鹿茸草嫩芽进行流水冲洗;2)、将上述流水冲洗后的嫩芽经0.1%w/v HgCl2处理6~10分钟后,无菌水冲洗5~8遍,接着用无菌滤纸吸干;然后切成0.8~1.2cm长的小段嫩芽I,将上述小段嫩芽I接种到诱导不定芽培养基上进行培养;培养条件为:16小时光照,光照强度10~30μmol m‑2.s‑1,温度为26~28℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;所述诱导不定芽培养基为:MS基本培养基+BA 0.5~1.0mg/l+糖20~30g/l+琼脂5~9g/l,pH为5.5~6.0;3)、待小段嫩芽I上长出的不定芽长至2.0~5.0cm高的小苗I时,割取小苗I;将此小苗I切成0.8~1.2cm长的小段嫩芽II,将上述小段嫩芽II接种到增殖培养基上进行培养;培养条件为:16小时光照,光照强度10~30μmol m‑2.s‑1,温度为26~28℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;4)、待小段嫩芽II上长出的不定芽长至2.0~5.0cm高的小苗时II,割取小苗II;将此小苗II切成0.8~1.2cm长的小段嫩芽III,将上述小段嫩芽III接种到增殖培养基上进行培养;培养条件为:16小时光照,光照强度10~30μmol m‑2.s‑1,温度为26~28℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;所述步骤3)和步骤4)中的增殖培养基均为:MS基本培养基+BA 0.3~0.5mg/l+NAA0.2~0.5mg/l+糖20~30g/l+琼脂5~9g/l,pH为5.5~6.0;5)、待小段嫩芽III上长出的不定芽长至3.0~5.0cm高的小苗III时,割取小苗III;将此小苗III接种到生根培养基中;所述生根培养基为:1/2MS基本培养基+NAA 0.2~0.5mg/l+糖30g/l+琼脂5~9g/l+活性炭2g/l,pH为5.5~6.0;6)、待上述小苗III长出大于2cm的至少3条根时,得可出瓶种植的种苗。 |