食品和饮料中胡萝卜成分快速检测试剂盒的制备和检测方法

摘要

本发明属于食品和饮料中植物源性成分的定性检测技术，具体地说是用实时荧光PCR技术检测食品和饮料中胡萝卜成分的试剂盒及方法。试剂盒包括PCR扩增反应液A、UNG酶B、Taq酶C；PCR扩增反应液A含有10×PCR反应缓冲液、硫酸镁、dNTP(含dUTP)、上游引物5′-CGACAAGCAAGCTTTACTCCAA-3′、下游引物5′-CGTCTGACACCCATGAGTCTGT -3′、TaqMan探针5′-FAM-TCAAAACAGCCTTGAAAAACCCCACCA-TRAMA-3′；胡萝卜成分的快速检测方法包括食品和饮料DNA的提取、胡萝卜成分的实时荧光PCR扩增和结果判定。其优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好。

主权项

一种胡萝卜成分快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1) (3)：(1)PCR扩增反应液A包括10×PCR反应缓冲液、0.1 0.4mmol/L dNTP(含dUTP)、2 4mmol/L硫酸镁、1 2U Taq酶、0.2 0.5U UNG酶、0.2 0.6μmol/L上游引物、0.2 0.6μmol/L下游引物′、0.2 0.6μmol/L TaqMan探针；其中10×PCR反应缓冲液含有100mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷—盐酸、500mmol/L氯化钾和1％曲拉通X 100；其中上游引物序列为：5′ CGACAAGCAAGCTTTACTCCAA 3′、下游引物序列为：5′ CGTCTGACACCCATGAGTCTGT 3′；其中TaqMan探针序列为：5′ TCAAAACAGCCTTGAAAAACCCCACCA 3′，其5′端标记FAM报告荧光集团，3′端标记TAMRA淬灭荧光集团；(2)UNG酶：1U/μL；(3)Taq酶：5U/μL。