一种基于位点特异性重组的克隆方法

摘要

本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为一种基于位点特异性重组的克隆方法。本发明基于丝氨酸重组酶φBT1 integrase的体外应用。本发明提供一对突变的整合酶识别序列，其被识别与切割的效率同野生型相当。在此基础上构建含有野生型和突变识别位点的用于位点特异性重组克隆的载体pDZM102，并提供目的基因克隆时引物序列的设计方法。本发明提供的克隆方法高效快速，特异性高，只需要在PCR扩增引物序列5’端加上整合酶识别位点，即可摆脱繁琐的酶切连接实现目的基因的快速克隆。

主权项

一对突变的φBT1整合酶识别的重组位点序列，其特征在于为attP1和attB1位点，其序列分别为SEQ No.1和SEQ No.3所示。