一种黄曲霉毒素B₁磁分离荧光定量检测试剂盒的制备方法

摘要

本发明属于纳米生物技术领域，具体涉及一种黄曲霉毒素B1免疫磁分离荧光定量检测试剂盒的制备方法。本发明为免疫检测系统与磁性纳米材料的快速分离技术、荧光纳米材料的发光特性相结合的一种测定方法，其先是制备磁性分离试剂——复合物(I)，然后使黄曲霉毒素B1偶联到复合物(I)上，再加入偶联有全抗原的荧光粒子溶液(复合物(II))，复合物(II)中的黄曲霉毒素B1与复合物(I)上的剩余抗体发生免疫反应，形成复合物(I)-复合物(II)的免疫夹心复合物(III)，这样黄曲霉毒素的浓度与最终被测溶液的荧光粒子溶液的荧光强度成反比，本发明的优点是检测快速、准确、明显、灵敏度高等。

主权项

一种黄曲霉毒素B1磁分离荧光定量检测试剂盒的制备方法，其步骤如下：(1)磁性粒子的制备：通过高温分解法制备粒径为5～18nm的Fe3O4磁性粒子，再利用细乳液法制备表面功能化的Fe3O4磁性粒子；(2)磁性分离试剂 复合物(I)的制备：利用缩合剂1 乙基 (3 二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，使Fe3O4磁性粒子与黄曲霉毒素B1抗体偶联形成复合物(I)；(3)荧光粒子的制备：通过有机相合成法制备荧光粒子，然后通过聚马来酸使荧光粒子表面功能化并转移到水相，得到荧光粒子；(4)荧光检测试剂 复合物(II)的制备：利用缩合剂1 乙基 (3 二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，使荧光粒子与黄曲霉毒素B1的全抗原偶联形成复合物(II)；(5)标准工作曲线的绘制：取6份体积均为200uL的磁性分离试剂 复合物(I)分别放入试管中，再依次分别加入不同浓度的黄曲霉毒素B1标准溶液20uL，在37℃下孵育20分钟后，在磁场中沉淀；然后倒去上清液，分别加入50uL荧光检测试剂复合物(II)溶液，在37℃下孵育20分钟，在磁场中沉淀；倒去上清液，再分别加入200uL、pH＝7.4、浓度为0.01mol/L的磷酸缓冲溶液，然后测定每个试管内溶液的荧光光谱，记录其最大荧光强度；再以荧光强度与黄曲霉毒素标准溶液的浓度为坐标绘制标准工作曲线；(6)对未知浓度的黄曲霉毒素B1溶液重复步骤(5)中的操作过程，得到样品的最大荧光强度，然后通过步骤(5)绘制的标准工作曲线读取样品中黄曲霉毒素B1的浓度。