一种烟草黑胫病菌的简便分离方法

摘要

本发明提供一种烟草黑胫病菌的简便分离方法，利用简易设备和简陋的空间条件营造洁净工作环境，快速分离烟草黑胫病菌，具体包括(1)病株选择与采集；(2)净化工作环境；(3)病菌分离；(4)病菌室温培养等步骤。即在简易条件下营造洁净的工作环境，酒精灯火焰灭菌形成无菌小环境，剖开病茎，镊取病茎内碟片状的病髓片，置于燕麦或利马豆培养基平板；培养基平板用封口膜封口，3～5个平板置于密封的培养盒内，室温培养3～5天，根据菌落形态即可得到目标病菌。本发明适用于田间采样后及时分离，整个操作所用设备简单，在不具备微生物实验室的条件下也可开展分离工作，分离病菌的纯度高，保持了病菌野生型的特性。

主权项

一种烟草黑胫病菌的简便分离方法，其特征在于利用简易设备和简陋的空间条件营造洁净工作环境，快速分离烟草黑胫病菌，具体包括以下步骤：A、病株选择与采集：选择田间症状典型，无其它症状，病茎无开裂或未被人为剖开，即呈碟片状的病髓片被密封包裹于健康茎杆中的病株作为目标病株；采集时去茎顶、叶片和根，仅留取病茎，冲洗表面浮尘后晾干，每根病茎分别用灭菌的卫生纸包裹分隔，置于一次性使用的干净封口袋内；B、净化工作环境：选择不通风的室内，用洁净水喷雾沉降空气中的尘埃，达到分离所需的空气环境要求；分离前，用点燃的酒精灯火焰灭菌形成无菌小环境；C、病菌分离：从上部剖开病茎，两手抓住病茎上端，扳开病茎至呈碟片状的病髓片露出；用火焰灭菌的弯头镊子夹取呈碟片状的病髓片，置于火焰下的培养基平板内，每个采样点用3～5个培养基平板，每个平板上放置病髓片3～5片；D、对分离的病菌进行室温培养，根据菌落形态挑选目标病菌。E、病菌鉴定：采用孢子灌根法或菌谷法接种感病品种红花大金元进行病菌鉴定，病情严重度大于1的菌株就有致病性。