西地那非及其衍生物的人工合成抗原的工艺

摘要

本发明公开了一种西地那非及其衍生物的人工合成抗原的工艺，包括以下步骤：先生成水溶性碳化二亚胺(EDC)，再将水溶性碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、半抗原化合物平衡至室温；取水溶性碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物，称好上述样品加入预先洗干净的圆底烧瓶，加入二甲基甲酰胺溶解，最后生成的溶液记为二号反应液；将载体蛋白按1∶0.15-0.2的量溶解于硼酸缓冲液的另一干净容器中，然后转入另一干净圆底烧瓶中，此溶液记为三号反应液；将二号反应液滴入三号反应液中；等所有反应结束后，透析上述步骤中所得的样品，经冷冻干燥为白色絮状产品，即为人工合成抗原。

主权项

一种西地那非及其衍生物的人工合成抗原的工艺，其特征在于：包括以下步骤：A、生成水溶性碳化二亚胺(EDC)：(1)、烷基化：往反应瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺(DMF)及那非类原料或拉非类原料，并通N2保护，在室温下进行搅拌，待二甲基甲酰胺(DMF)完全溶解后，快速称取浓度为60％的氢化钠(NaH)，并将其加入所述反应瓶中，搅拌50 70分钟，直至溶液无气泡产生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反应瓶中，注入完毕后，在室温下搅拌11 13小时，之后将反应液倾入水中分散，以氯仿进行提取，合并提取液，以无水Na2SO4进行干燥，之后过滤，再经过减压浓缩后得到固体，加入无水乙醚打浆洗涤所述固体，之后进行过滤，最后真空干燥得到新的固体，此固体为烷基化物；(2)、水解：将无水乙醇和上述步骤所得的烷基化物加入新的反应瓶中，进行搅拌分散，再加入NaOH溶液，加热回流反应2小时，停止加热稍冷却后，将反应液转入单口瓶中，减压浓缩得糊状物，再加入水，以盐酸调节至pH值为7 9的液体，以氯仿进行提取，合并提取液，再用饱和食盐水洗一次，以无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩得白色固体，用甲醇重结晶，得白色粉状固体，此固体为水溶性碳化二亚胺(EDC)；B、生成人工合成抗原：(1)、将上述步骤中所得的水溶性碳化二亚胺(EDC)、N 羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、半抗原化合物平衡至室温；(2)、取上述步骤中所得的水溶性碳化二亚胺、N 羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物，三者的摩尔比为：半抗原化合物∶水溶性碳化二亚胺∶N 羟基琥珀酰亚胺＝1∶8 12∶13 16，将其置入圆底烧瓶，然后加入上述步骤中所得的二甲基甲酰胺溶解，为保证反应完全，在室温避光的条件下进行搅拌，最后生成的溶液记为二号反应液；(3)、当所述水溶性碳化二亚胺、N 羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物在二甲基甲酰胺中反应完全后，现配载体蛋白溶液(BSA/KLH)，将载体蛋白与硼酸缓冲液按1∶0.15 0.2的量溶解于另一容器中的硼酸缓冲液，然后转入另一圆底烧瓶中，此溶液记为三号反应液；(4)、将二号反应液按每10秒1滴的速度滴入三号反应液中，直至将二号的反应液加完后，先在室温避光的条件下进行搅拌，之后在3 5℃条件下避光搅拌，待反应完全后，生成溶液，并将生成的溶液记为四号反应液，四号反应液中载体蛋白与半抗原化合物比例为：1∶15 25；(5)、等所有反应结束后，将四号反应液置于20000 30000分子截留透析袋中，透析袋中还装有0.01 0.02M磷酸盐缓冲液，pH值为7.0 7.5，将透析袋在3 5℃的条件下进行透析，每隔3 5小时换一次磷酸盐缓冲液；(6)、经上述透析步骤最终所得的产品，经冷冻干燥为白色絮状产品，即为人工合成抗原。