血清或血浆中微小RNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种有效富集血清或血浆中微小RNA的提取方法，用Trizol和氯仿预分离样品中微小RNA，然后通过标记有-Si-OH功能基团的磁珠的方法捕获预分离样品中的微小RNA，用磁性分离器分离磁珠及样品；经过简单的洗涤干燥后，加无RNA酶水后通过水浴箱加热洗脱，进一步通过磁性分离器分离即可。本发明的方法可用于候选疾病标志物微小RNA的大规模验证和临床应用时的微小RNA的提取。本发明方法能高效富集血清或血浆中微小RNA，不仅方便快捷，且价格低廉。

主权项

一种血清或血浆中微小RNA的提取方法，其特征在于，依次包括以下步骤：(1)将血清或血浆样本与RNA抽提试剂以体积比为1∶1.5～2.5在第一离心管内震荡混合后静置，再向第一离心管中加入氯仿震荡混合，并在4～6℃温度下离心分离得到上层液体，为预分离样品；(2)将步骤(1)得到的预分离样品收集在第二离心管中，并向第二离心管中加入标记有 Si OH功能基团的磁珠，混合均匀后静置；再将第二离心管置于磁性处理器上分离，移除管内液体，在第二离心管中得到捕获有微小RNA的磁珠；(3)向经步骤(2)分离后得到的装有捕获有微小RNA的磁珠的第二离心管中，加入高盐缓冲液混合均匀，并置于所述的磁性处理器上分离，移除管内液体；再向第二离心管中加入体积百分比为70～75％的乙醇，并置于所述的磁性处理器上分离，移除管内液体，得到洗涤后的捕获有微小RNA的磁珠；(4)干燥步骤(3)得到的第二离心管中的磁珠，再向第二离心管中加入洗脱液，在60～70℃的水浴下静置，从磁珠上洗脱捕获的微小RNA；(5)将步骤(4)得到的第二离心管先在室温离心，再置于所述的磁性处理器上分离，吸取离心管内液体进行收集，即为含有微小RNA的提取样品。