长效降血糖肽的重组表达及其在糖尿病治疗药物中的应用

摘要

本发明涉及分子生物学领域中的基因克隆和基因表达，长效降血糖肽把GLP-1中二肽基肽酶作用的关键位点从原来的丙氨酸突变为甘氨酸，解决二肽基肽酶降解的问题，再与人白蛋白基因在基因水平进行拼接，最后在毕赤酵母表达系统中分别表达出四种GLPAG与人白蛋白通过柔性连接子(柔性Linker)连接的融合蛋白，这种融合蛋白既保留了GLP-1的活性又能使其在体内的半衰期大大延长，降血糖作用明显，无低血糖现象发生。

主权项

长效降血糖肽的重组表达，其特征在于：氨基酸序列如下：H2N HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR Linker DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL COOH上述的‘H2N ’代表蛋白质氨基端，‘ COOH’代表蛋白质羧基端，Linker代表柔性连接子，序列中的氨基酸缩写：A丙氨酸；R精氨酸；N天冬酰胺；D天冬氨酸；C半胱氨酸；Q谷氨酰胺；E谷氨酸；G甘氨酸；H组氨酸；I异亮氨酸；L亮氨酸；K赖氨酸；M甲硫氨酸；F苯丙氨酸；P脯氨酸；S丝氨酸；T苏氨酸；W色氨酸；Y酪氨酸；V颉氨酸；柔性连接子Linker的氨基酸序列为TSGGSGGS或GGSGGS或GGSGGSGGGGS或GGS。