太子参四倍体不定根诱导培养方法

摘要

本发明涉及一种生物工程领域的太子参四倍体不定根诱导培养方法，用氯化汞对太子参种子表面进行消毒，然后接种到种子萌发培养基中培养；切取下胚轴接种到胚性愈伤组织诱导培养基中诱导愈伤组织；将愈伤组织继代，并在秋水仙碱中浸泡后转到分化培养基中，培养出再生植株；对再生植株根尖的染色体进行检测，用流式细胞仪筛选纯合四倍体植株；将纯合四倍体株系的茎段接种到生根用愈伤组织诱导培养基中诱导愈伤组织；将愈伤组织接种到不定根诱导培养基中诱导不定根；将不定根接种到摇瓶中，放置在摇床上振荡培养；将振荡培养的不定根接种到反应器中。本发明培养的太子参四倍体不定根具有生长快、有效成份含量高的特点。

主权项

一种太子参四倍体不定根诱导培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，用氯化汞溶液对太子参种子表面进行消毒，然后接种到种子萌发培养基中，暗培养；所述种子萌发培养基为添加1mg/L赤霉素的MS培养基；步骤二，切取下胚轴接种到胚性愈伤组织诱导培养基中，进行愈伤组织诱导，所述胚性愈伤组织诱导培养基为添加2mg/L萘乙酸，0.2mg/L2，4 氯化苯氧乙酸，0.2mg/L激动素的MS培养基；步骤三，将步骤二生成的愈伤组织继代2 4次，并将继代后的愈伤组织在秋水仙碱中浸泡，然后转到分化培养基中，培养出再生植株；所述分化培养基为添加质量百分比为3％的血红素、0.2mg/L的毒莠锭、1.0mg/L的赤霉素、大量元素减半且不含硝酸铵的MS培养基；步骤四，对再生植株根尖的染色体进行检测，根据染色体检测结果选取四倍体植株，并用流式细胞仪筛选纯合四倍体株系；步骤五，将纯合四倍体株系的茎段接种到生根用愈伤组织诱导培养基中诱导愈伤组织；所述生根用愈伤组织诱导培养基为添加2mg/L的萘乙酸的MS培养基；步骤六，将步骤五生成的愈伤组织接种到不定根诱导培养基中诱导不定根；所述不定根诱导培养基为添加3.0mg/L的吲哚丁酸、0.1mg/L的6 苄氨基嘌呤、50g/L的蔗糖且大量元素减半的MS培养基；步骤七，将步骤六诱导出的四倍体不定根接种到摇瓶中，然后放置在摇床上振荡培养；步骤八，将振荡培养后的不定根接种到反应器中进行间歇喷雾式培养；所述继代在不含激素的MS培养基中进行，每次20 40天；所述间歇喷雾式培养，其使用的反应器为喷雾式反应器，反应器中使用的培养基为添加1.5mg/L IBA、0.05mg/L6 BA、30g/L蔗糖且大量元素减半的MS培养基。