从红豆杉细胞悬浮培养液分离紫杉醇的方法

摘要

从红豆杉细胞悬浮培养液分离紫杉醇的方法，属于天然药物化学物质或药品原料的制造方法，目的在于减少胞外紫杉醇的流失，提高原料利用率，降低成本和环境污染。本发明包括：(1)细胞匀浆步骤，(2)膜分离步骤，(3)紫杉醇提取步骤，(4)大孔吸附树脂富集步骤，(5)精分离步骤，得到纯度大于98％的紫杉醇。本发明在分离纯化紫杉醇的工艺中引入了现代膜分离技术，可大幅度缩小用于萃取的有机溶剂耗费及大尺寸萃取设备，同时减少了胞外紫杉醇的流失，降低成本和环境污染，并且明显提高原料的利用率。

主权项

1.一种从红豆杉细胞悬浮培养液分离紫杉醇的方法，包括：(1)细胞匀浆步骤：将收获期的红豆杉细胞悬浮培养液过滤，分离细胞与培养液，用匀浆机将细胞破碎为匀浆，然后加入原培养液中，获得红豆杉细胞悬浮匀浆；(2)膜分离步骤：将红豆杉细胞悬浮匀浆先通过孔径小于等于10μm的滤膜过滤，得到细胞残片滤渣和滤液；滤液通过相对分子质量截留值为15000～25000的超滤膜过滤；流出的滤液再通过相对分子质量截留值为1000～5000的超滤膜过滤，后两次超滤膜过滤压力为0.1-0.4MPa，温度为20℃～30℃，后两次超滤膜过滤后滤液浓缩倍数10-30倍，将细胞残片滤渣和后两次超滤膜上浓缩物合并，得到膜分离截留物；(3)紫杉醇提取步骤：将膜分离截留物在30℃～60℃温度下烘干至含水量小于5％，研磨成粉末，加入提取溶剂，在常温下用超声波辅助提取，过滤，回收滤液溶剂，得浸膏；(4)大孔吸附树脂富集步骤：用甲醇或乙醇溶解浸膏，加载到大孔树脂柱上，用体积百分比含甲醇20％～40％的水溶液冲洗，除去水溶性杂质和色素，用体积百分比含甲醇60％～80％的水溶液洗脱，收集3倍柱体积的洗脱液，将洗脱液中的甲醇蒸干，加入等体积的萃取溶剂进行液-液萃取，收集有机溶剂层，蒸干，得到大孔树脂柱富集紫杉醇粗品；(5)精分离步骤：用正相层析和反相层析相结合对紫杉醇粗品进行分离，得到纯度大于98％的紫杉醇。