发明名称 |
应用AS-PCR检测牛白细胞粘附缺陷的方法 |
摘要 |
本发明属于家畜分子检测技术领域,具体涉及应用AS-PCR方法在体外检测牛白细胞粘附缺陷的方法。制备了一种用于牛粘附缺陷检测方法的特异性PCR引物,它包括:CD18基因扩增引物:突变型扩增产物长度为500bp;引物1:5’AAGATGACGAGGAGCAGAA 3’,引物2:5’GTCCATCAGGTAGTACAGGC 3’;野生型扩增产物长度为818bp;引物3:5’CAAGGGCTACCCCATCGA 3’,引物4:5’CAGGACTGCGTGGCTAAA 3’。本发明制备的牛白细胞粘附缺陷的方法的特异性引物,可直接应用于在体外开展牛粘附缺陷的致病基因的筛选,以利于对牛粘附缺陷个体进行早期淘汰。 |
申请公布号 |
CN101899511A |
申请公布日期 |
2010.12.01 |
申请号 |
CN201010225605.2 |
申请日期 |
2010.07.09 |
申请人 |
华中农业大学 |
发明人 |
张淑君;杨利国;王成;张滢寅;贾启涛;李翔;熊家军;滑国华;梁爱心;刘耘;江一波 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
王敏锋 |
主权项 |
1.应用AS-PCR在体外检测牛白细胞粘附缺陷的方法,其步骤如下1)设计特异性引物对,该引物对的DNA序列如下所示:基因CD18的扩增引物:突变型:扩增产物长度为500bp,引物1,正向引物:5′AAGATGACGAGGAGCAGAA3′,引物2,反向引物:5′GTCCATCAGGTAGTACAGGC3′;野生型:扩增产物长度为818bp;引物3:5′CAAGGGCTACCCCATCGA3′,引物4:5′CAGGACTGCGTGGCTAAA3′;2)PCR过程如下:将同一份DNA样本使用2个20μL体系进行扩增:20μL体系包括10×Buffer2.0μL,25mMMg2+1.5μL,10μM用于AS-PCR反应的引物各0.5μL,10mMdNTP0.4μL,5U/μLTaq酶0.4μL,500ng/μLDNA1.0μLddH2O13.7μL,混匀、瞬时离心;PCR反应条件:94℃预热10min,94℃变性45s,65℃45s,72℃延伸45s,从第二步94℃变性到第四步72延伸进行35个循环,72℃延伸10min,15℃10min。然后各取3μLPCR产物混合点样,1.5%琼脂糖凝胶电泳检,并记录结果。 |
地址 |
430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号 |