一种提高水曲柳体细胞胚发育同步化的方法

摘要

一种提高水曲柳体细胞胚发育同步化的方法，它涉及一种提高体细胞胚发育同步化的方法。它解决了现有水曲柳体细胞胚胎发育技术中存在体细胞胚胎发育不同步化，体细胞胚发育的一致性差，导致体细胞胚再生植株的存活率低以及利用化学调控，导致体细胞胚畸形率高的问题。方法：一、外植体接种于体细胞胚诱导培养基中培养，得球形体细胞胚；二、球形体细胞胚接种于同步化调控培养基中培养，得成熟体细胞胚；三、成熟体细胞胚干燥后接种于萌发培养基中培养，得水曲柳小植株，即完成提高水曲柳体细胞胚发育同步化。本发明实现了对水曲柳体细胞胚同步化发育的物理调控，使体细胞胚畸形率降低到50％以下，体细胞胚发育的一致性达80％以上，存活率高达64％～81％。

主权项

1.一种提高水曲柳体细胞胚发育同步化的方法，其特征在于提高水曲柳体细胞胚发育同步化的方法按以下步骤实现：一、将水曲柳外植体接种于体细胞胚诱导培养基中，在温度为22～30℃、湿度为60％～70％的无光照条件下培养至得到球形体细胞胚；二、将球形体细胞胚接种于同步化调控培养基中，在温度为22～30℃、湿度为60％～70％、每20～30天更换新鲜同步化调控培养基的无光照条件下培养40～60天，得成熟体细胞胚；三、将成熟体细胞胚从外植体上剥离出来后置于无菌的空培养皿中，在温度为22～30℃、湿度为60％～70％的自然光照条件下干燥10～30min，然后接种于萌发培养基中，在温度为22～30℃、湿度为60％～70％、每天光照14～18h、光照强度为1500～2000Lux、每20～30天更换新鲜萌发培养基的条件下培养60～80天，得水曲柳小植株，即完成提高水曲柳体细胞胚发育同步化；其中步骤一中体细胞胚诱导培养基是以MS1/2培养基为基本培养基，且每1L体细胞胚诱导培养基中还包含400～700mg的酸水解酪蛋白、40000～70000mg的蔗糖、1.0～1.5mg的奈乙酸、0.1～0.5mg的6-苄基氨基嘌呤和6000～7000mg的琼脂，pH值为5.8；步骤二中同步化调控培养基是以MS1/2培养基为基本培养基，且每1L同步化调控培养基中还包含20000～50000mg的蔗糖和6000～7000mg的琼脂，pH值为5.8；步骤三中萌发培养基是以MS1/2培养基为基本培养基，且每1L萌发培养基中还包含20000～25000mg的蔗糖、100～200mg的酸水解酪蛋白、0.01～0.05mg的奈乙酸和6000～7000mg的琼脂，pH值为5.8。