染色体的无痕迹修饰方法

摘要

本发明提供一种对染色体的无痕迹修饰方法。首先，构建包含阳性筛选标记、反筛选标记、内切核酸酶I-SceI、诱导性启动子、I-SceI识别位点、与靶染色体核酸序列同源的靶核酸置换序列的重组盒；然后，用电转化的方法把上述DNA片段输入包含重组质粒的宿主；接着，通过I-SceI介导的双链断裂修复现象从所希望的重组体中敲除以下基因序列：阳性筛选标记、可诱导启动子、I-Scel基因、反筛选标记，最后在蔗糖培养基上筛选最终重组体。该方法可以对染色体靶基因进行插入、敲除或置换，不会留下任何筛选标记或外源DNA序列，是无痕修饰宿主细胞DNA序列的有效方法。

主权项

染色体的无痕迹修饰方法，其特征在于：首先，构建包含阳性筛选标记、反筛选标记、内切核酸酶I‑SceI、诱导性启动子、I‑SceI识别位点、与靶染色体核酸序列同源的靶核酸置换序列的重组盒；然后，用电转化的方法把上述DNA片段输入包含重组质粒的宿主；接着，通过I‑SceI介导的双链断裂修复现象从所希望的重组体中敲除以下基因序列：阳性筛选标记、可诱导启动子、I‑Scel基因、反筛选标记；最后，在蔗糖培养基上筛选最终重组体。