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一种小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)、饲养层细胞制备采用原代鼠胚成纤维细胞作为饲养层；取无菌孕12‑15天小鼠胚胎，剪碎，然后采用重量百分含量为0.125‑0.25％的胰蛋白酶，20‑25℃消化30‑60分钟，共1‑2次，用含有高糖DMEM和体积分数为10％胎牛血清为培养液，置于37℃、含体积分数为5％的CO2环境下，培养5‑10天，使用第2‑4代增殖状态好的PMEF，加入10mg/L的丝裂霉素C，37℃，作用2.5小时，充分洗涤后得饲养层细胞备接种用；(2)、小鼠胚胎干细胞的培养将mESCs以1.0×108L‑1‑1.0×109L‑1的密度接种于饲养层细胞上，置于37℃、含体积分数为5％的CO2环境下培养，每隔24‑48小时换PMEF培养液，每3‑4天按1∶4～1∶6比例传代，使mESCs逐渐得到扩增和纯化；(3)、小鼠胚胎干细胞的诱导分化将扩增和纯化后的mESCs接种于无饲养层、无包被的培养板中，使用神经干细胞培养液和mESCs培养液的混合液，置于37℃、含体积分数为5％的CO2环境下培养；换液后使用神经干细胞培养液，逐渐更换为完全使用无血清添加碱性成纤维细胞生长因子的神经细胞培养液，直至第5‑10天；上述神经干细胞培养液，为DMEM‑F12，体积分数为5％胎牛血清、5％马血清和mESCs培养液含高糖DMEM、β‑巯基乙醇、非必需氨基酸、体积分数为15％胎牛血清，重组人白血病抑制因子，即按照mESCs培养液与神经干细胞培养液的比例1∶1培养，换液后使用神经干细胞培养液培养，逐渐更换为完全使用无血清添加浓度为10μg/L碱性成纤维细胞生长因子的神经细胞培养液培养，其中含有DMEM‑F12、N2、B27和碱性成纤维细胞生长因子。 |
