超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法

摘要

本发明涉及检测方法，一种超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法。现有技术的缺点是：由于样品检测限度要求高；样品成分复杂，前处理难度大；检测灵敏度无法满足人们的要求。本发明方法为制备二氧化硅纳米粒子；将氨基化二氧化硅纳米粒子与抗体在缩合剂的作用下37℃孵育1-10h，高速离心1-4次除去未结合抗体与缩合剂；将离心后的沉淀物复溶，加入缩合剂及羧基化水溶性量子点，高速离心除去游离的量子点与缩合剂；制得二氧化硅/量子点复合微球探针；组建免疫层析试纸条体系。本发明的优点是：检测方法简便、结果准确、直观；灵敏度高；价格低廉；可做半定量检测、定量检测；应用广泛。

主权项

1.一种超灵敏量子点微球免疫层析试纸条快速检测方法，包括以下步骤：(1)制备氨基化二氧化硅纳米粒子：A、由表面活性剂、油相、水相、助剂配制反相微乳液体系；在氨水为催化剂的情况下水解正硅酸乙酯制备小粒径二氧化硅纳米粒子；B、大粒径的二氧化硅纳米粒子可用法在乙醇/水溶液中用氨水催化TEOS合成；C、将二氧化硅纳米粒子用硅烷偶联剂进行氨基化改性；得氨基化二氧化硅纳米粒子；(2)将氨基化二氧化硅纳米粒子与抗体在缩合剂的作用下37℃孵育1-10h，高速离心1-4次除去未结合抗体与缩合剂；(3)将离心后的沉淀物复溶，加入缩合剂及羧基化水溶性量子点，37℃下孵育1-10h，高速离心除去游离的量子点与缩合剂；制得二氧化硅/量子点复合微球探针，用稀释液复溶，放入冰箱4℃条件下保存备用；(4)将划有二抗与包被抗原的硝酸纤维素膜、吸水垫、喷有量子点微球探针的玻璃纤维素膜、玻纤膜或聚酯膜样品垫组装在背板上，组建免疫层析试纸条体系；(5)对于检测灵敏度要求高的检测物，增加量子点微球探针与样品的孵育步骤，增加反应时间：移取量子点微球探针于96孔板小孔中，冷冻干燥或低温真空干燥后密闭保存，在检测时滴加样品处理液于小孔中进行复溶，静置反应2-10分钟；吸取；加入没有结合垫的免疫层析试纸条中检测；(6)半定量与定量检测：A、半定量检测：滴加样品后于紫外灯下观测条带显色情况；B、定量检测：制作具有激发光源、信号采集、光信号数字转换部件与软件的定量检测平台。