一种碳源依赖型瑞氏木霉遗传转化系统及其应用

摘要

本发明公开了一种碳源依赖型瑞氏木霉遗传转化系统，该转化系统包括出发菌株即缺失己糖激酶基因1的营养缺陷型菌株H.jecorina TU-6H和携带有目的基因以及缺陷型回补基因己糖激酶基因1的载体。本发明还公开了此转化系统在利用瑞氏木霉表达促红细胞生成素和热休克蛋白HSP70上的应用。此转化系统在利用甘露醇作为碳源时可以得到更高的转化效率，是一种高效、低成本及方便的转化系统。

主权项

一种碳源依赖型瑞氏木霉遗传转化系统，包括出发菌株和携带有目的基因以及缺陷型回补基因的载体；其特征在于：所述出发菌株为缺失己糖激酶基因1的营养缺陷型菌株H.jecorina TU-6H，该菌株不能以甘露醇或山梨醇为唯一碳源生长；所述目的基因为人源激素基因或瑞氏木霉蛋白分泌相关基因；所述缺陷型回补基因为己糖激酶基因1即hxk1；其中，上述缺失己糖激酶基因1的营养缺陷型菌株H.jecorina TU-6H是以含有己糖激酶基因1基因1.4kb的5’侧翼序列和1.8kb的3’侧翼序列及标记基因5’-乳清酸核苷酸脱羧酶基因pyr4的质粒pΔhxk1作为敲除载体，采用原生质体转化的方法转化出发菌株H.jecorina TU-6，即ATCC MYA-256菌株，而构建得到的同源敲除己糖激酶基因1的菌株。