发明名称 |
一种人17号染色体计数探针的制备方法及其应用 |
摘要 |
本发明所涉及一种人17号染色体计数探针的制备方法,还涉及利用人17号染色体计数探针制备一种人17号染色体计数试剂盒,应用本发明的人17号染色体计数探针及相应的试剂盒可以对人17号染色体进行准确、快速的计数。 |
申请公布号 |
CN101886103A |
申请公布日期 |
2010.11.17 |
申请号 |
CN200910039410.6 |
申请日期 |
2009.05.12 |
申请人 |
中山大学达安基因股份有限公司 |
发明人 |
李明;何瑰;陈娟 |
分类号 |
C12P19/34(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I |
主分类号 |
C12P19/34(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种人17号染色体计数探针的制备方法,其特征在于制备步骤包括:(1)引物设计:人17号染色体着丝粒区域PCR扩增引物设计和验证;(2)克隆质粒制备:配制PCR反应体系,以人基因组为模板进行PCR扩增,将纯化后的目的产物与载体pMD18-T连接,制备出包含目的片段的克隆质粒pMD18-T-C17;(3)C17探针制备:可采用以下两种方法进行制备方法一:以包含目的片段的质粒pMD18-T-C17DNA为模板,进行PCR扩增,通过PCR反应将氨基修饰的dUTP掺入到目的产物中,然后经过PCR产物纯化、浓缩、定量;对纯化后的PCR产物进行荧光标记、纯化、计算标记效率、定量,而获得C17探针,避光、-20℃储存;方法二:以包含目的片段的质粒pMD18-T-C17DNA为模板,使用荧光素标记的dUTP直接进行PCR扩增,将PCR产物标记荧光,然后进行纯化、计算标记效率、定量,定量,而获得C17探针,避光、-20℃储存;(4)C17探针验证:使用人类正常分裂中期淋巴细胞滴片进行探针验证。 |
地址 |
510665 广东省广州市高新技术产业开发区香山路19号 |