用于磺胺类多种残留免疫分析的人工抗原的制备方法

摘要

用于磺胺类多种残留免疫分析的人工抗原的制备方法，属于小分子化合物(分子量小于1000道尔顿)免疫化学分析技术，涉及具有p-氨基苯磺酰胺结构的磺胺类多种药物的人工抗原和抗体及其制备，本发明克服了传统半抗原合成方法繁琐、产率低和抗体广谱性差的缺点。本发明以4-(4-氨基苯磺酰基)苯甲酸为半抗原，与血蓝蛋白等载体蛋白连接合成人工抗原，再经动物免疫制成抗体，该抗体具有针对多种磺胺药物良好的特异性，可用于磺胺类多种药物残留的同时快速定量检测。该抗体不仅具有针对多种磺胺药物良好的特异性，还具有良好的广谱性，并为建立快速准确的磺胺多残留定量分析方法奠定了基础，具有广阔的应用前景。

主权项

用于磺胺类多种残留免疫分析的人工抗原的制备方法，其特征在于用下述步骤制得：(1)合成半抗原采用4-氨基苯甲酸与4-乙酰氨基苯磺酰氯反应，一步法合成含羧基的半抗原，具体做法是：将2～4mmol的4-乙酰氨基苯磺酰氯溶解在5mL干燥吡啶中，N2保护下，逐滴加入含2～3mmol 4-氨基苯甲酸的干燥吡啶溶液6mL，磁力搅拌。滴加完毕后，反应混合物在85～95℃下回流2～3h，用薄层层析即TLC法监测反应进程。接着加入20～30mL 2mol·L-1 NaOH，减压除去吡啶。反应体系再回流2～3h，用TLC监测反应进程，接着冷却到15-25℃，用浓盐酸调pH值到3.5～4.，产物用20～40mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相并用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，残留物过硅胶柱纯化得目标物；(2)合成人工抗原用半抗原4-(4-氨基苯磺酰基)苯甲酸，以酰胺基CO＝NH为桥梁，通过混合酸酐法，连接到卵清蛋白或血蓝蛋白上，具体做法是：取10～20mg载体蛋白溶于2mL 0.1～0.2mol/L的碳酸氢钠溶液中，取半抗原4-(4-氨基苯磺酰基)苯甲酸0.01～0.05mmol，碳化二亚胺0.02～0.06mmol，溶于1mL二甲基甲酰胺中，混合液在冰浴下逐滴加到载体蛋白溶液中，在20～25℃下，搅拌反应4～8h，再次加入0.01～0.03mmol碳化二亚胺，后放于4℃冰箱内12～24h，反应完成后将反应液装入透析袋，4℃下、pH＝7.4的PBS中透析，分装，-20℃保存。