暗褐网柄牛肝菌菌种的培养方法

摘要

本发明是暗褐网柄牛肝菌菌种培养从母种、液体菌种至固体菌种的培养方法。其特征是使用马铃薯、蔗糖、葡萄糖、琼脂、酵母膏、MgSO4、KH2PO4、橡胶木锯木屑或其他杂木屑、谷粒、水等原料按照一定比例配制母种、液体菌种及固体菌种培养基，按照从母种、液体菌种至固体菌种的培养方法，先培养暗褐网柄牛肝菌母种及液体菌种，然后将液体菌种接种于固体培养基上培养成固体菌种。本发明所提供的培养基特别适合暗褐网柄牛肝菌母种、液体菌种及固体菌种的培养。利用该培养方法，可快速进行暗褐网柄牛肝菌从母种、液体菌种至固体菌种的培养。

主权项

暗褐网柄牛肝菌菌种培养方法，其特征在于按以下步骤进行：a、用母种培养基培养暗褐网柄牛肝菌子实体组织块制备母种，母种培养基的制备由下述原料及方法配制而成：马铃薯        150.0～200.0g葡萄糖        15.0～20.0g酵母膏        1.0～2.0gMgSO4         1.0～2.0gKH2PO4        1.0～2.0g琼脂          15.0～20.0g水            1000ml培养基配制及菌种接种培养方法：a1)将新鲜马铃薯洗净、去皮、称量、切成薄片放入大烧杯中，加入定量的水，煮沸20分钟过滤取滤液，加入葡萄糖、琼脂、酵母膏、MgSO4、KH2PO4，煮沸至琼脂完全溶化，pH值4.0～6.0，得母种培养基；将培养基分装于三角瓶中，120℃灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中即可使用；a2)用解剖刀分离暗褐网柄牛肝菌野生子实体组织块，置于有母种培养基的培养皿中培养菌丝体生长并扩繁，具体是：采集野生的暗褐网柄牛肝菌子实体，用清水冲洗净、晾干，用75％酒精溶液消毒子实体表面，将子实体一掰为二，用解剖刀取菌柄与菌盖交界的中间部位2-3mm的菌肉组织块放于倒有母种培养基的培养皿中，置于28℃的培养箱中培养30天，菌丝体长满培养皿，得母种；b、用液体培养基培养液体菌种，液体培养基的原料组成如下：马铃薯        150.0～200.0g蔗糖          15.0～20.0g酵母膏        1.0～2.0gMgSO4         1.0～2.0gKH2PO4        1.0～2.0g水            1000ml培养基配制及菌种接种培养方法：b1)将新鲜马铃薯洗净、去皮、称量，切成薄片放入大烧杯中，加入定量的水，煮沸20分钟过滤取滤液，在滤液中加入蔗糖、酵母膏、MgSO4、KH2PO4，混匀，pH值4.0～6.0，得液体培养基；将配制好的液体培养基分装于三角瓶中，每瓶300ml，120℃灭菌30分钟，待冷却后备用；b2)将在上述步骤a2)中获得的母种转管活化后，将菌丝体连同培养基切成2mm～4mm的碎菌块接种于步骤b1)中瓶装的培养基中，在28℃，125r/min回旋式摇床中振荡培养， 培养8天得到液体菌种；c、用固体培养基培养固体菌种，固体培养基的原料组成如下：锯木屑                10.0kg谷粒                  4.0～6.0kgMgSO4                 10.0～20.0gKH2PO4                10.0～20.0g培养基配制及菌种接种培养方法：c1)将谷粒称量放入桶中，加水浸泡10～12小时，滤除多余水份备用，将MgSO4、KH2PO4溶解于适量的水中喷洒入锯木屑料堆中，再加入浸泡滤水后的谷粒，拌料混合均匀，最后调培养料含水量至60.0％，pH 4.0～6.0，得固体培养基；将配制好的固体培养基分装于广瓶中或菌种袋中，每瓶或每袋700ml，120℃灭菌60分钟，待冷却后备用；c2)将在上述步骤b2)中获得的液体菌种接种于步骤c1)中瓶装或袋装的培养基中，置于28℃培养室中培养40～50天，菌丝体长满培养瓶或培养袋，得固体菌种。