| 主权项 |
一种具有发展成牛的核转置胚之培育方法，包括：(a)提供牛之卵母细胞；(b)提供牛之供核细胞；(c)将供核细胞或其细胞核置入卵母细胞中；(d)将供核细胞与卵母细胞进行融合而产生四倍体核转置胚；(e)将核转置胚进行激活处理；(f)去除卵母细胞核；和(g)培养去除卵母细胞核之核转置胚。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(a)步骤之卵母细胞系经由体外培养后选取具第一极体者。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(b)步骤之供核细胞为体细胞。如申请专利范围第3项所述之培育方法，其中该体细胞含有外源基因。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(b)步骤之供核细胞进一步进行饥饿培养。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(b)步骤之供核细胞不进行饥饿培养。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中于(c)步骤之供核细胞系置入卵母细胞之卵黄膜间隙。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中于(c)步骤之供核细胞系直接注入卵母细胞之细胞质内。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(d)步骤之卵母细胞系未经去核者。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(d)步骤系利用电融合。如申请专利范围第1项所述之培育方法，其中该(e)步骤激活处理系将融合的细胞培养于含有钙离子载体(calcium ionophore)和6-DMAP之激活液中。一种培育牛胎儿之方法，包括：(a)提供牛之卵母细胞；(b)提供牛之供核细胞；(c)将供核细胞或其细胞核置入卵母细胞中；(d)将供核细胞与卵母细胞进行融合而产生四倍体核转置胚；(e)将核转置胚进行激活处理；(f)去除卵母细胞核；(g)培养去除卵母细胞核之核转置胚；和(h)将核转置胚移置入母牛生殖道中而形成胎儿。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该(a)步骤之卵母细胞系经由体外培养后选取具第一极体者。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞为体细胞。如申请专利范围第14项所述之方法，其中该体细胞含有外源基因。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞进一步进行饥饿培养。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞不进行饥饿培养。如申请专利范围第12项所述之方法，其中于(c)步骤之供核细胞系置入卵母细胞之卵黄膜间隙。如申请专利范围第12项所述之方法，其中于(c)步骤之供核细胞系直接注入卵母细胞之细胞质内。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该(d)步骤之卵母细胞系未经去核者。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该(d)步骤系利用电融合。如申请专利范围第12项所述之方法，其中该该(e)步骤激活处理系将融合的细胞培养于含有钙离子载体和6-DMAP之激活液中。一种培育牛之方法，包括：(a)提供牛之卵母细胞；(b)提供牛之供核细胞；(c)将供核细胞或其细胞核置入卵母细胞中；(d)将供核细胞与卵母细胞进行融合而产生四倍体核转置胚；(e)将核转置胚进行激活处理；(f)去除卵母细胞核；(g)培养去除卵母细胞核之核转置胚；和(h)将核转置胚移置入母牛生殖道中而形成胎儿，并经过所有胎儿成长及分化期间而生育出牛。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(a)步骤之卵母细胞系经由体外培养后选取具第一极体者。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞为体细胞。如申请专利范围第25项所述之方法，其中该体细胞含有外源基因。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞进一步进行饥饿培养。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞不进行饥饿培养。如申请专利范围第23项所述之方法，其中于(c)步骤之供核细胞系置入卵母细胞之卵黄膜间隙。如申请专利范围第23项所述之方法，其中于(c)步骤之供核细胞系直接注入卵母细胞之细胞质内。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(d)步骤之卵母细胞系未经去核者。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(d)步骤系利用电融合。如申请专利范围第23项所述之方法，其中该(e)步骤激活处理系将融合的细胞培养于含有钙离子载体和6-DMAP之激活液中。一种培育牛重组细胞之方法，包括：(a)提供牛之卵母细胞；(b)提供牛之供核细胞；(c)将供核细胞或其细胞核置入卵母细胞中；(d)将供核细胞与卵母细胞进行融合；(e)将融合细胞进行激活处理；和(f)去除卵母细胞核。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该(a)步骤之卵母细胞系经由体外培养后选取具第一极体者。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞为体细胞。如申请专利范围第36项所述之方法，其中该体细胞含有外源基因。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞进一步进行饥饿培养。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该(b)步骤之供核细胞不进行饥饿培养。如申请专利范围第34项所述之方法，其中于(c)步骤之供核细胞系置入卵母细胞之卵黄膜间隙。如申请专利范围第34项所述之方法，其中于(c)步骤之供核细胞系直接注入卵母细胞之细胞质内。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该(d)步骤之卵母细胞系未经去核者。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该(d)步骤系利用电融合。如申请专利范围第34项所述之方法，其中该该(e)步骤激活处理系将融合的细胞培养于含有钙离子载体和6-DMAP之激活液中。一种牛的重组细胞，其系经由如申请专利范围第34至44项任一项所述之方法培育而得。 |
