高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法

摘要

本发明涉及一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，目前还没有检测成本低，检测限达0.1μg/kg的测定方法。本发明包括标准溶液制备、标准曲线制作、蜂胶样液制备和氯霉素残留量检测工序；蜂胶样液制备工序中加入1mol/L的NaOH溶液溶解蜂胶样品，用水稀释以释出蜂胶样品中的目标物，再用HClO4进行酸化以沉淀蜂胶样品中的蜂胶成分，蜂胶样液用1mol/L的NaOH溶液将滤液的pH值调节到10.5；最后将蜂胶样液通过高效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪测得氯霉素的残留量。本发明检测成本低，检测效率高，检测限能达0.1μg/kg，定量限为0.3μg/kg，线性相关系数为0.9999。

主权项

一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，其特征在于：该方法所用到的原料包括纯度大于99.0％的氯霉素标准品，浓度为100mg/l的D5-氯霉素标准品，为农残级的乙酸乙酯，为分析纯的氢氧化钠，为优级纯的正己烷，为液相色谱纯的乙腈，蜂胶样品；该方法所用到的设备包括三重四极杆串联质谱仪，配有二元泵、在线脱气机、自动进样器、数据处理软件的高效液相色谱仪；所述三重四极杆串联质谱仪中的离子源温度为600℃，辅助加热气为55.00psi，干燥气为65.00psi，气帘气为25.00psi，碰撞气为5.00psi，电喷雾电压为-4100.00V，离子化法为负离子模式；所述高效液相色谱仪为Agilent 1200series，色谱柱为Hypersil ODS2，色谱柱的规格为4.6mm×150mm，5μm，柱温为30℃，进样量为20μl；该方法包括标准溶液制备工序、标准曲线制作工序、蜂胶样液制备工序和氯霉素残留量检测工序；所述标准溶液制备工序如下：a、氯霉素贮备标准溶液配制步骤：称取氯霉素标准品10mg用乙腈定容至10ml配成浓度为1000mg/L的氯霉素贮备标准溶液，将该氯霉素贮备标准溶液置于-18℃以下保存待用；b、氯霉素中间标准液配制步骤：取a中的氯霉素贮备标准溶液100μl用乙腈定容至10ml配成浓度为10mg/L的氯霉素中间标准液；c、氯霉素氘代内标中间液配制步骤：采用D5-氯霉素标准品代替氯霉素标准品，重复上述a步骤和b步骤，制得浓度为10mg/L的氯霉素氘代内标中间液；d、临时标准使用液配制步骤：取氯霉素中间标准液用体积浓度为30％的乙腈水溶液配至5μg/kg和50μg/kg，取氯霉素氘代内标中间液用体积浓度为30％的乙腈水溶液配至200μg/kg；所述标准曲线制作工序中，取标准溶液制备工序中制得的氯霉素贮备标准溶液、氯霉素中间标准液、氯霉素氘代内标中间液和临时标准使用液，通过高效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪得到标准曲线；所述蜂胶样液制备工序中，取蜂胶样品2g和浓度为200μg/kg的D5-氯霉素标准品内标50ul置于一号50ml离心塑料瓶中并充分混合，然后静置5min以上，再向一号50ml离心塑料瓶中加入5ml浓度为1mol/L的NaOH溶液并不断振荡提取5min，使蜂胶样品充分溶解，然后向一号50ml离心塑料瓶中加入5ml水并摇匀，再向一号50ml离心塑料瓶中加入10ml浓度为5％的HClO4进行酸化并充分摇匀而制得蜂胶液；该蜂胶液先在常温下超声提取5min，再在转速为3000rpm下离心5min而得到上层离心液，然后对上层离心液进行过滤而制得滤液；取滤液10ml置于二号50ml离心塑料瓶中，用浓度为1mol/L的NaOH溶液将滤液的pH值调节到10.5，然后向二号50ml离心塑料瓶中加入10ml乙酸乙酯并充分混合3min，在转速为3000rpm下离心2min而得到乙酸乙酯层，然后将乙酸乙酯层置于15ml塑料离心管中，该乙酸乙酯层在35℃下进行氮气吹干，再向15ml塑料离心管中加入体积浓度为30％的乙腈水溶液1ml并进行超声溶解，然后向15ml塑料离心管中加入2ml正己烷并充分混合而制得离心液，将该离心液在转速为800rpm下离心2min而得到下层样液，最后将下层样液过0.22μm的滤膜而制得蜂胶样液；所述氯霉素残留量检测工序中，取蜂胶样液制备工序中制得的蜂胶样液，通过高效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪，并结合标准曲线制作工序中得到的标准曲线而测得蜂胶中氯霉素的残留量；该方法的检测限为0.1μg/kg，定量限为0.3μg/kg。