MLCR探针、二步反应模式和悬浮芯片检测用捕获探针

摘要

一种MLCR探针、二步反应模式和悬浮芯片检测用捕获探针。MLCR探针是一组针对每个待检位点各合成的四个单链DNA探针，末端连通用序列，用于将LCR转变为MLCR；二步反应模式是MLCR探针先进行MLCR反应转变为连接产物，连接产物末端的通用序列分别与通用引物相匹配，后进行均衡扩增连接产物的PCR反应；捕获探针横跨待检位点中被耐热连接酶识别的切刻，在芯片检测温度能同第二步PCR扩增产物杂交。本发明结合了LCR、MLPA的优点，克服了LCR、MLPA检测灵敏度低、多重PCR难以均衡扩增的缺点，具有高通量、超灵敏、高特异的特点，适于各种样品特别是痕量、降解DNA样品的基因检测和单核苷酸多态性分析。

主权项

一种MLCR的探针，是一段与待检目标位点核酸序列相同或互补的单链寡核苷酸序列，其特征在于：所述一组MLCR的探针是针对每个待检位点合成四个单链DNA探针，用于将检测单位点的LCR转变为检测多位点的MLCR；其中两个单链DNA探针与待检位点一链序列一致，所有位于位点上游的检测位点上游探针5′的末端接通用序列GGGTTCCCTAAGGGTTGGA；所有位于检测位点相同链下游的检测位点下游探针3′的末端接通用序列TCTAGATTGGATCTTGCTGGCGC，且下游探针5′末端磷酸化；其它两个单链DNA探针与互补链序列一致，各检测位点互补链上游探针5′和下游探针3′的末端不接通用序列，但下游探针5′末端磷酸化；各位点相同链上游探针和下游探针相邻，与待测位点杂交复性后仅留切刻；各位点不同链上游探针和下游探针互补，形成双链平末端接头结构。