一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法

摘要

本发明公开了一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，由泥蚶的消化腺组织的特异性蛋白和由泥蚶的特异性的DNA序列来鉴别，由于不同海区的泥蚶的消化腺组织内的特异性蛋白，SOD酶和MDH酶的酶带各有异同，另外不同海区的泥蚶的特异性的DNA序列也各有其特异性，因此从泥蚶的消化腺组织的特异性蛋白和泥蚶的特异性的DNA序列就能鉴别泥蚶的产地，便于识别和养殖味美价高的泥蚶。

主权项

一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，由所述的泥蚶的消化腺组织的特异性蛋白和由所述的泥蚶的特异性的DNA序列来鉴别，所述的特异性蛋白用下述步骤进行标定：a、取样：随机取所述的泥蚶的消化腺组织并称重；b、提取酶液：把所述的泥蚶的消化腺组织放入玻璃匀浆器中，然后加入重量是所述的泥蚶的消化腺组织的3倍的0.05％巯基乙醇水溶液，在冰浴条件下制成匀浆液；把所述的匀浆液放入温度为4℃的冷冻离心机中，用12000rpm离心30min，取得上清液，即为酶液；c、电泳：在所述的酶液中加入适量的溴酚兰指示剂，然后用浓度7～7.5％的聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳时间为3h～5h；d、显色：将所述的聚丙烯酰胺凝胶置于染色液中，放在37℃恒温箱中，在所述的聚丙烯酰胺凝胶上形成显色的条带，随时观察所述的条带的显色结果，至所述的条带显色清晰为止，然后用7.5％的乙酸固定所述的条带，即为酶带；所述的特异性的DNA序列用下述步骤进行标定：e、取样：从所述的泥蚶中摘取肌肉组织，剪碎所述的肌肉组织；f、提取DNA：用常规方法从剪碎的所述的肌肉组织中提取DNA；g、PCR反应扩增：用特异性引物对提取的所述的DNA进行PCR反应扩增，得到所述的PCR反应扩增的产物；h、电泳：用1％～1.5％的琼酯糖凝胶对所述的PCR反应扩增的产物进行电泳10～20min，在所述的琼酯糖凝胶中加入溴化乙锭，从所述的琼酯糖凝胶中得到特异性谱带；i、测序：在所述的特异性谱带上测定所述的泥蚶的特异性的DNA序列；其特征在于所述的特异性引物为F：5’-GCTCTTCCCGCTTCACTCG-3’，R：3’-GGGTCGATGAAGAACGCAG-5’，所述的泥蚶的特异性的DNA序列分别如SEQID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。