一种用于寒区嗜菌异小杆昆虫病原线虫冷冻储存方法

摘要

一种用于寒区嗜菌异小杆昆虫病原线虫冷冻储存方法，它涉及生物冷冻储存技术领域。它解决了传统的0℃以上的低温储存昆虫病原线虫存在储存期短、长途运输困难、存活率低和致病力弱的问题。冷冻储存方法操作步骤：1)准备储存介质和储存袋；2)接种；3)变温冷冻储存；4)解冻；5)、线虫的分离。本发明利用高寒地区特有的寒区嗜菌异小杆(Heterorhab ditis bacteriophora)昆虫病原线虫进行变温冷冻储存，打破了当前昆虫病原线虫生产规模和应用面积的局限性，储存期达到5-6个月，储存介质中线虫回收率达90％，解冻后线虫存活率80％以上，防治地下害虫效果达到80％以上，解决了不利长途运输和0℃以上的长期储存使线虫致病力明显下降的难题，实现了农业生产实践中害虫生物防治的良好效果。

主权项

一种用于寒区嗜菌异小杆昆虫病原线虫冷冻储存方法，其特征在于冷冻储存方法按以下步骤操作：步骤一、准备储存介质和储存袋：储存介质为蛭石，将蛭石过40-60目筛，去掉碎末，然后121℃湿热灭菌25-30min，加水至蛭石含水量为45-60％；储存袋为80-100目的尼龙网袋，将储存介质放入储存袋中；步骤二、接种：将10℃保存的新繁殖出来的昆虫病原线虫接种到储存介质蛭石中；按104-5IJs/g蛭石的剂量接种侵染期幼虫；步骤三、变温冷冻储存：接种后的蛭石放入冰箱，置于4-5℃环境中24h，之后以1℃/10min的速度降温到-1℃，并在-1℃恒温3h，然后再以1℃/10min的速度降温到-4--5℃，并在-4--5℃保存；即完成昆虫病原线虫的冷冻储存；步骤四、解冻：以1℃/7min的速度升温至4℃，4℃停留1h后，再置于室温解冻24h；步骤五、线虫的分离：将装有蛭石的尼龙网袋置于15-25℃水中浸泡，取出尼龙网袋后，浸泡液即为线虫悬浮液。