植物DNA病毒卫星沉默载体及其构建和使用方法

摘要

本发明公开了一种植物DNA病毒卫星沉默载体及其构建和使用方法。该植物DNA病毒卫星沉默载体来源于烟草曲茎病毒相伴随的卫星分子——DNA1，并在DNA1的Rep开放阅读框下游引入了单一的多克隆位点。本发明还提供了利用该植物DNA病毒卫星沉默载体进行植物功能基因组研究的方法。用RT-PCR方法克隆植物目的基因的cDNA片段，并插入DNA1病毒卫星沉默载体的多克隆位点构建成含有植物目的基因的重组病毒卫星沉默载体。该重组病毒卫星沉默载体和番茄黄化曲叶病毒的DNA-A通过农杆菌注射接种植物，诱导沉默植物的目的基因后使植物的表型发生改变，并利用实时荧光定量RT-PCR技术对目的基因的表达量进行检测从而确定该基因的功能。

主权项

一种植物DNA病毒卫星沉默载体，其特征在于，它是含有两个正向重复拷贝的烟草曲茎病毒DNA 1分子的侵染性克隆，并在两个DNA 1分子中间的复制酶开放阅读框下游位置引入多克隆位点XbaI、SmaI和BamHI；所述的烟草曲茎病毒DNA 1分子，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。