一种可同时检测人线粒体细胞色素b基因12个位点多态性的方法

摘要

本发明涉及一种可同时检测人线粒体细胞色素b基因12个位点多态性的方法。本发明所述方法运用提供了一种可在同一体系中同时检测线粒体细胞色素b基因(Cytochrome b，Cytb)12个位点多态性的方法。它运用聚合酶链反应(PCR)技术结合单碱基延伸和荧光微阵列杂交技术在同一反应体系中实现同时对线粒体cytb基因上述12个位点多态性的检测。单碱基延伸产生的荧光强度和类型只对应一种基因型，一个多态性位点最多只会有3中特征性荧光，因此只需DNA测序验证一次即可得出以后所有相同峰型对应样本的基因型。该方法与直接测序的检测法相比，时间快，实验在一天内完成，通量高，在同一反应中直接测出12个多态性位点，而成本低廉，结果判断直观。

主权项

一种可同时检测人线粒体细胞色素b基因序列上位置为15301 A/G，15223 T/C，15508 T/C，14783 T/C，15535 T/C，14978 A/G，15662 A/G，15402 T/C，15043 A/G，15930 A/G，14766 T/C，15851 A/G 12个位点多态性的方法，它包括下述步骤：(1)设计用于扩增含cytb基因全长的DNA片段的引物为为序列1～2所述核苷酸序列；(2)设计分别用于检测cytb基因12个位点的延伸引物，使用贝克曼公司的在线软件设计12个单碱基延伸引物，用于检测cytb基因12个位点的延伸引物为序列3～14所述核苷酸序列，特异序列标签为序列15～26所述核苷酸序列；(3)聚合酶链反应扩增cytb全基因；(4)进行单碱基延伸反应，进行荧光标记；(5)杂交，扫描后判断待测样品的基因型；(6)对所述的待测样品的基因型进行测序验证。