报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型及药物筛选方法的建立

摘要

一种荧光报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型及药物筛选方法，以及利用4get(IL-4/GFP-enhanced transcript)小鼠筛选治疗哮喘病药物的具体方法，包括T细胞体外培养分化、同时刻药物高通量筛选及流式细胞仪检测。本发明中的T细胞体外培养分化与药物筛选分别涉及免疫学与化学生物学领域，应用特有的荧光报告基因小鼠在T细胞分化过程中可指示特定细胞因子的产生，具备高通量筛选小分子药物及天然产物提取物的能力。基于该模型的药物筛选平台可用于筛选新药，以及开发一批对机体免疫反应和对T细胞分化、重要细胞因子分泌具有调控作用的药物。

主权项

一种报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型及药物筛选的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：第一、超净台内取荧光报告基因哺乳动物脾脏、淋巴结，浸入1640培养基，用注射器针芯碾碎过200目金属滤网，溶解红细胞后制成单细胞悬液；第二、96孔板中，以1×106--107个细胞/mL密度、200μl每孔培养于RPMI培养基内；第三、将第二步的96孔板分成实验组和对照组，并与第四步同时刻或早于第四步向实验组加入待筛选药物，向对照组加入待筛选药物中使用的溶剂DMSO或H2O；第四、向第二步的96孔板中加入抗体与细胞因子刺激初始CD4+T细胞分化；第五、48h收取96孔板中细胞，行CD4表面染色后，用流式细胞仪检测分化出的T细胞占总体CD4+T细胞的比例，即EGFPT cell/CD4+T cell百分率；第六、与对照组相比，能够使EGFP T cell/CD4+T cell百分率有显著增高或者降低的药物为候选药物，并用药物剂量效应关系进一步验证。