ENSAYO PARA DETERMINAR LA ACTIVIDAD DE TOXINA CLOSTRIDIAL COMBINANDO FRET Y POLARIZACION DE FLUORESCENCIA.

摘要

Un procedimiento para determinar la presencia o actividad de una toxina clostridial, que comprende las etapas de: (a)tratamiento con una muestra, en condiciones adecuadas para la actividad proteasa de la toxina clostridial, un sustrato de toxina clostridial, comprendiendo dicho sustrato de toxina clostridial (i)un fluoróforo donante; (ii)un aceptor que tiene un espectro de absorbancia que solapa con el espectro de emisión de dicho fluoróforo donante; y (iii)un péptido o peptidomimético que comprende una secuencia de reconocimiento de toxina clostridial que comprende un sitio de escisión, en el que dicho sitio de escisión se interpone entre dicho fluoróforo donante y dicho aceptor y en el que, en las condiciones apropiadas, se muestra transferencia resonante de energía entre dicho fluoróforo donante y dicho aceptor; en el que la escisión de dicho sustrato de toxina clostridial da como resultado un cambio en polarización de fluorescencia de al menos 3 unidades de milipolarización (mP); (b)excitación de dicho fluoróforo donante con luz polarizada plana; y (c)determinación de la polarización de fluorescencia de dicho sustrato tratado con relación a un sustrato control, en la que un cambio en la polarización de fluorescencia de al menos 3 mP de dicho sustrato tratado en comparación con dicho sustrato control es indicativo de la presencia o actividad de dicha toxina clostridial en dicha muestra.