在重组毕赤酵母中表达假黑盘菌素成熟多肽的方法

摘要

本发明提供了一种在毕赤酵母细胞中以组成型方式表达和生产假黑盘菌素成熟多肽重组蛋白的方法，其包括：1)优化假黑盘菌素成熟多肽基因；2)采用分子克隆等方法得到毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子DNA序列，将假黑盘菌素成熟多肽基因置于甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子调控之下，与质粒连接得到新的、组成型和分泌型的毕赤酵母高效表达载体；3)利用该载体转化毕赤酵母，获得的重组毕赤酵母菌株产生具有生物活性的假黑盘菌素成熟多肽；4)对该工程菌株高密度发酵条件以及重组蛋白的表达和纯化进行优化。采用本发明方法制备得到的假黑盘菌素成熟多肽可应用于医疗、食品、饲料及科研等领域，适于规模化生产假黑盘菌素蛋白。

主权项

一种含有编码假黑盘菌素成熟多肽的DNA序列的表达载体，其包括酵母组成型启动子，位于启动子下游的编码α-因子分泌信号肽的核苷酸序列以及编码假黑盘菌素成熟多肽的DNA序列，所述编码假黑盘菌素成熟多肽的DNA序列的5’端具有酵母Kex2基因表达产物切割识别序列GAGAAAAGA。