黄瓜绿斑驳花叶病毒一步RT-PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及黄瓜绿斑驳花叶病毒一步RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括一步RT-PCR反应的各种试剂如下：黄瓜绿斑驳花叶病毒的上游引物，黄瓜绿斑驳花叶病毒的下游引物，PCR Buffer，Mgcl2，dNTPs，RNA酶抑制因子，反转录酶，DNA聚合酶，含有黄瓜绿斑驳花叶病毒的阳性对照，不含有黄瓜绿斑驳花叶病毒的阴性对照，RNase-free ddH2O。本发明不仅制作方法简单，便于大规模产业化生产，而且检测方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强和准确度好的优点，整个检测过程在一个PCR管内一步完成，既简化操作程序、缩短检测时间，又避免交叉污染、提高检测效率，适合大批量样品的快速检测。

主权项

一种黄瓜绿斑驳花叶病毒一步RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：1)A#管，内装黄瓜绿斑驳花叶病毒的上游引物，浓度为10μmol/L，引物序列为5’-TGCTTCTTATGTTCCCGTCA-3’；2)B#管，内装黄瓜绿斑驳花叶病毒的下游引物，浓度为10μmol/L，引物序列为5’-GCCCATAGAAACTTCAACGTC-3’；3)C#管，内装PCRBuffer，浓度为10×；4)D#管，内装Mgcl2，浓度为25mmol/L；5)E#管，内装dNTPs，浓度为10mmol/L；6)F#管，内装RNA酶抑制因子，浓度为40U/μL；7)G#管，内装反转录酶，浓度为5U/μL；8)H#管，内装DNA聚合酶，浓度为5U/μL；9)I#管，内装含有黄瓜绿斑驳花叶病毒的阳性对照CK+；10)J#管，内装不含有黄瓜绿斑驳花叶病毒的阴性对照CK-；11)K#管，内装RNase-free ddH2O。