一种用磁性纳米粒子提取转基因大豆DNA的方法

摘要

一种用磁粒子提取转基因大豆DNA的方法，属于纳米材料和分子生物学技术领域。本发明包括磁性纳米粒子的制备，磁性纳米粒子用于转基因大豆DNA的提取。本发明提供了一种全新的提取转基因大豆DNA的方法，具有快速、操作简便、耗时短等优点，提取的DNA完全可以用于DNA杂交和PCR等分子生物学实验。

主权项

一种用磁性纳米粒子提取转基因大豆DNA的方法，其特征在于包括磁性纳米粒子制备，磁性纳米粒子与转基因大豆DNA提取液混合，加入聚乙二醇PEG-NaCl缓冲液，用磁铁将吸附了转基因大豆DNA的磁性纳米粒子与溶液分离，用70％乙醇清洗吸附了转基因大豆DNA的磁性纳米粒子，用TE缓冲液洗脱磁性纳米粒子上的转基因大豆的DNA；(1)磁性纳米粒子聚集体的制备，步骤如下：①称取0.65g无水三氯化铁和0.4g柠檬酸三钠，加入20mL乙二醇作为溶剂，驱除氧气，磁力搅拌使之全部溶解；②称取1.2g无水乙酸钠加入到反应体系中，继续搅拌，置于反应釜中油浴加热至220℃，同时磁力搅拌，反应10h停止加热，继续磁力搅拌冷却至室温；③反应后的溶液加入二倍体积的无水乙醇，超声震荡10min，6000rpm离心10min，弃上清；④沉淀部分继续加入与步骤③相同体积的无水乙醇，超声震荡10min，6000rpm离心10min，弃上清；⑤沉淀部分加入10mL去离子水，超声震荡10min，6000rpm离心10min，弃上清；⑥沉淀分散于10mL去离子水中，室温保存备用；(2)用磁性纳米粒子提取转基因大豆DNA，步骤如下：①用粉碎机将转基因大豆粉碎；②称量50mg的转基因大豆粉末，转入1.5mL离心管，分两次加入65℃预热的DNA提取缓冲液进行提取，每次加入350μL，涡旋震荡混合均匀，65℃水浴30min，期间颠倒离心管数次；第一次提取后离心分离，沉淀部分进行第二次提取，提取后离心分离，弃沉淀；两次提取液合并；所用DNA提取缓冲液组成为：含0.5M Tris-HCl、0.5M NaCl和50mM乙二胺四乙酸EDTA的质量浓度4％十二烷基磺酸钠SDS溶液，pH8.0；③合并后的提取液10000rpm离心10min，取上清，加入15μL磁性纳米粒子，再加入PEG-NaCl缓冲液，使溶液中NaCl的终浓度为2M，轻轻地上下颠倒数次，混合均匀，室温下静置10min；所用PEG-NaCl缓冲液组成为：质量浓度30％PEG和6M NaCl溶液；④用磁铁将吸附有转基因大豆DNA的磁性纳米粒子与溶液分离，去上清；⑤加入500μL质量浓度70％乙醇清洗吸附了转基因大豆DNA的磁性纳米粒子两次，37℃烘箱烘干；⑥加入50μL TE缓冲液，65℃水浴孵育5min，混匀后用磁铁吸附磁性纳米粒子，取上清，即为转基因大豆DNA溶液；保存于-22℃，备用；所用TE缓冲液组成为：含50mM Tris-HCl和10mM EDTA的溶液，pH8.0。