磷酸化和/或糖基化蛋白质或多肽的一步富集修饰测定方法

摘要

本发明公开一种磷酸化和/或糖基化蛋白质或多肽的一步富集修饰测定方法。该方法包括如下步骤：1)蛋白质或多肽的端炔基或叠氮基修饰；2)端炔基修饰的蛋白质或多肽的树脂捕获；3)树脂上端炔修饰多肽/蛋白的切割。本发明提供的蛋白质或多肽的富集修饰测定方法，不仅能对翻译后修饰的蛋白质或多肽进行富集纯化，而且能在蛋白质或多肽上增加一个分子片段，该分子片段具有质谱标签及质谱信号增益的作用。该方法在生命分析领域具有广阔的应用前景。

主权项

磷酸化和/或糖基化蛋白质或多肽的富集修饰测定方法，包括如下步骤：1)将目标底物与饱和氢氧化钡水溶液、端炔基标签化合物的乙醇溶液混合，温育后得到端炔基修饰的目标底物；其中，所述目标底物为磷酸化蛋白质或多肽，或糖基化蛋白质或多肽；2)在所述端炔基修饰的目标底物中加入叠氮基修饰的聚苯乙烯树脂，并加入碘化亚铜、抗坏血酸或硫酸铜中的任意一种，以点击化学反应将所述端炔基修饰的目标底物捕获到所述叠氮基修饰的聚苯乙烯树脂上；3)将所述叠氮基修饰的聚苯乙烯树脂上连接的所述端炔基修饰的目标底物分子切割下来，同时在所述端炔基修饰的目标底物分子末端自动形成一个质谱信号增益标签，之后利用质谱完成所述磷酸化和/或糖基化蛋白质或多肽的测定。