冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法

摘要

本发明属于真菌栽培技术领域，具体是一种冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法，解决了现有人工冬虫夏草不能规模化培养的问题。步骤如下：选择头孢霉和头棒束；制备头孢霉液体菌种和头棒束孢霉液体菌种；配置固体培养基，原料为：玉米渣、黄豆粉、小麦粒、高粱粒、蚕蛹粉、全鸡蛋、黑豆含皮粗粉、脱脂胡麻籽油以及营养液，营养液包括：鸡血、松针、胡萝卜、黑豆、牛骨；混匀接种；培养得子实体和菌丝体。本发明所得子实体和菌丝体经检测，子实体含腺苷≥0.02％，含虫草素≥0.1％，菌丝体含腺苷≥0.055％，指纹图谱测试结果显示其基因相似度＞97％，急性毒性实验、长毒实验测试显示无毒，可为天然虫草的替代品。

主权项

一种冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法，其特征在于步骤如下：1)、菌种的选择，如下两个无性世代试管种：①、头孢霉【Cephalosporium sinensis chen sp nov.】②、头棒束孢霉【Isaria cretacea.】两个无性世代菌种分别在PDA培养基转管培养后，历练复壮处理，提纯复壮后的菌种保存备用，在4℃冰箱中存放，时间不超过2个月；2)、液体菌种制备，各组成的比例为重量比，①、头孢霉液体菌种制作：成分：蚕蛹粉、酵母片、白糖、VB、无机盐添加剂、水，各成分比例按顺序为：2∶1∶6∶0.3∶0.7∶90，混合以上比例的成分得到头孢霉液体培养基，调节PH至6～7，高压120℃灭菌处理40分钟，后将100份头孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头孢霉菌种15份，缓慢摇匀，培养一周，温度：15～20℃，即得头孢霉液体菌种，保存备用，无机盐添加剂包括MgSO4·7H2O、K2HPO4·3H2O、[NH4]2SO4，无机盐添加剂的各组分相对上述头孢霉液体培养基的重量比为：MgSO4·7H2O 0.2％、K2HPO4·3H2O 0.3％、[NH4]2SO4 0.2％，②、头棒束孢霉液体菌种的制作成分：蚕蛹粉、酵母粉、白糖、VB、玉米粉、水，各成分的比例：2∶1∶6∶0.1∶6∶85，各成分混为头棒束孢霉液体培养基，调节PH6～7，高压120℃灭菌40分钟，将100份头棒束孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头棒束孢霉菌种15份，以15～20℃条件下摇匀，培养7天，即得头棒束孢霉液体菌种，保存备用；3)、固体培养基的配置，两个菌种用同种固体培养基，配方如下：玉米渣30～40份、黄豆粉2～10份、小麦粒15～20份、高粱粒5～10份、蚕蛹粉2～3份、全鸡蛋5～10份、黑豆含皮粗粉20～30份、脱脂胡麻籽油3～5份，以上物料分别用水浸泡至无干心后捞出来沥去表皮水分，混匀为湿料，分装加入营养液成固体培养基，灭菌，每份固体培养基包括湿料100g和加入的营养液10ml，营养液：鸡血、松针、胡萝卜、黑豆、牛骨按1∶1∶2∶3∶3比例混合于重量为上述各物料总重量4倍的水中，煮沸2小时，过滤得滤液，然后在滤液中补水得营养液，滤液补水后的总重量与煮沸前各物料和水混合的总重量相等，4)、混匀接种，在无菌条件下，每100ml头孢菌液体种中混入10ml的头棒束孢霉液体种，缓慢摇匀即得混合菌种，然后立即接种，每份固体培养基中接入20ml混合菌种，封口后进入培养室培养，5)、培养①、避光，17℃±1℃，每日早晚通风两次各30分钟，②、接种后培养20～26天，以2001x日光灯每日照射≥10小时，培养温度改变为9～24℃，昼夜温差≥15℃，保持6～10天，此时子实体的原基和白色菌丝已经开始生长，此时，在18～23℃的散光中培养15天左右，即可收获，分别取出子实体和菌丝体。