一种利用基因工程方法增强烟草抗冻性能的方法

摘要

本发明属分子生物学、酶学、生理学、育种学以及基因工程等领域。具体涉及利用莨菪AOC基因的cDNA构建高效植物表达载体和工程菌株在烟草中表达该基因、筛选转化子、验证抗冻性能的方法。本方法从莨菪中克隆AOC基因，构建了植物高效表达载体，导入农杆菌并遗传转化烟草，测定转基因烟草叶片低温处理后的电导率。本方法可以在烟草中过量表达莨菪AOC基因，提高烟草的抗冻性能。本发明方法能在适合的条件下培养抗冻性能提高的烟草转化子，获得转基因后代，并能提高烟草的种质，增强栽培适宜性。

主权项

一种利用基因工程方法增强烟草抗冻性能的方法，其特征在于利用具有编码莨菪丙二烯氧化物环化酶的核苷酸序列(Genbank No.：AY708383)的植物表达载体，采用转基因方法在烟草细胞、组织、器官、植株中过量表达莨菪丙二烯氧化物环化酶基因的DNA分子；包括下述步骤：(1)采用基因克隆或人工合成基因方法获得莨菪丙二烯氧化物环化酶基因的片断；(2)把莨菪丙二烯氧化物环化酶基因片断连于表达调控序列，形成植物高效表达载体；(3)采用转基因方法转移莨菪丙二烯氧化物环化酶基因片断到烟草的细胞、组织、器官或植株中；(4)筛选和鉴定转化子；(5)培养转化子，获得转基因后代；(6)测定转基因后代的抗冻性能。