发明名称 |
假丝酵母二羟基丙酮合成酶的原核表达载体及其构建方法和应用 |
摘要 |
本发明提供一种高效表达假丝酵母二羟基丙酮合成酶蛋白DAS的原核表达载体(pET28a-DAS),该载体含有T7启动子和终止子、细菌核糖体结合位点和DAS基因及一个组氨酸标签,从假丝酵母中克隆出DAS基因,用T7启动子控制它在大肠杆菌中的表达,利用该载体转化大肠杆菌(BL21),可实现DAS蛋白的高水平表达,表达的DAS蛋白80%以上形成包涵体,用高浓度的尿素溶解包涵体后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DAS蛋白,再从凝胶中回收DAS蛋白可得到纯度极高的DAS蛋白,用于抗体的制备。DAS重组蛋白表达量很高,因此不需要大规模培养细菌,纯化DAS蛋白的操作相当简单,成本较低,极易重复使用。 |
申请公布号 |
CN101838662A |
申请公布日期 |
2010.09.22 |
申请号 |
CN201010117291.4 |
申请日期 |
2010.03.04 |
申请人 |
昆明理工大学 |
发明人 |
陈丽梅;肖素勤;孙振;张婧 |
分类号 |
C12N15/70(2006.01)I;C12N15/52(2006.01)I;C12N9/00(2006.01)I;C07K16/40(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/70(2006.01)I |
代理机构 |
昆明今威专利代理有限公司 53115 |
代理人 |
赛晓刚 |
主权项 |
一种原核表达载体,在该原核表达载体中含有假丝酵母DAS基因。 |
地址 |
650093 云南省昆明市五华区学府路253号(昆明理工大学) |