在双水相系统中分离重组蛋白的方法

摘要

本发明涉及为了基于应用具有胆碱亲和力的多肽，在水溶液中分配、分离和纯化重组蛋白的方法。本发明基于一现象，通过该现象能够混合含有预定组分的两种水性溶液，最终分成不同密度的双相。融合的蛋白，结合至上述具有胆碱亲和力的多肽的蛋白质优先地定位于其中一相，而来自细胞提取物的大部分蛋白倾向于移动至另一相。经过一系列洗涤操作以去除余下的杂质后，通过添加对结合至目的蛋白质的多肽具有亲和力的可溶性分子，反转蛋白质的定位。本发明包括改变目的蛋白或多肽在一相或另一相中的存在，从而使得以高效和高纯度纯化所述蛋白或多肽。本发明是用于分离优选地用胆碱结合结构域标签的重组蛋白的一种有成本效益的办法。

主权项

用于分配或分离含有对胆碱具有亲和力的多肽序列的融合蛋白的方法，其特征在于：a)细胞培养物或细胞提取物，其表达含有对胆碱具有亲和力的序列的融合多肽，该序列包含至少一个胆碱结合结构基序(CBR或“胆碱结合重复”；代码Pfam PF01473)，并且其优选地来自一个肺炎链球菌的酰胺酶LytA的C末端结构域；b)含有水中的超过5％的聚乙二醇(PEG)以及盐或可溶性聚合物的提取物或培养物的混合物，导致该混合物自发分离成双水相；c)含有对胆碱具有亲和力的序列的融合多肽优先地富集于具有较高聚乙二醇浓度的相。