假单胞菌M18的RNA快速提取方法

摘要

本发明涉及的是一种生物工程技术领域的假单胞菌M18的RNA快速提取方法。包括如下步骤：收集106～107个细胞假单胞菌M18，加入变性液和氯仿，混匀，离心，菌液在管中分为三层；吸取500μl上层液体转移至硅膜柱中，并加入异丙醇，离心；加入乙醇至硅膜柱中，离心；重复上一步；再离心，保证硅膜柱内无液体；加入双蒸水、洗脱液至硅膜柱内；离心，用一干净离心管收集洗脱液。本发明提取时间大大缩短，从提取RNA的方法中可以看出：提取的时间在6min之内；没有DNA污染；提取过程易于自动化。对过柱条件优化后，提取出的RNA纯度很高；通过分光光度计测定提取出的RNA其吸光值A260/A280＝1.93。

主权项

一种假单胞菌M18的RNA快速提取优化方法，其特征在于，包括如下步骤：①收集106～107个细胞假单胞菌M18，加入变性液和氯仿，混匀，离心，菌液在管中分为三层；②吸取500μl上层液体转移至硅膜柱中，并加入异丙醇，离心；③加入乙醇至硅膜柱中，离心；④重复上一步；⑤再离心，保证硅膜柱内无液体；⑥加入双蒸水、洗脱液至硅膜柱内；⑦离心，用一干净离心管收集洗脱液；所述的变性液，其制备方法为：a)取一个80ml的瓶子，称取固体异硫氰酸胍3.56g～7.12g，将其放入瓶子中；b)称取十二烷基肌氨酸钠0.02g～0.06g，并将其倒入瓶子中；c)配制0.75M柠檬酸钠溶液，吸取225μl～450μl放入瓶子，配制2M醋酸钠溶液，吸取300μl～600μl加入到瓶子中；d)配制14.3Mβ-巯基乙醇，吸取45μl～90μl加入到瓶子之中；e)加入饱和苯酚2ml～4ml；f)加入异戊醇100μl～200μl；g)用双蒸水定容至10ml；h)60℃水浴加热至完全溶解，然后用纯乙酸调节pH到3.5～4.0；i)放置在室温下备用。