采用转喜树aoc基因提高喜树愈伤组织中喜树碱含量的方法

摘要

本发明属生物技术领域，涉及一种采用转aoc基因提高喜树愈伤组织中喜树碱含量的方法。本发明从喜树中克隆aoc基因，构建含aoc基因的植物表达载体，用根癌农杆菌介导，将aoc基因导入喜树细胞并再生出愈伤组织；PCR和半定量RT-PCR检测外源目的基因aoc的整合和表达情况，高效液相色谱检测器测定喜树愈伤组织中喜树碱含量，筛选喜树碱含量提高的转基因喜树愈伤组织。本发明获得的转基因喜树愈伤组织中喜树碱的含量显著提高，本发明提供了一种提高喜树细胞培养物中喜树碱含量的方法，对解决喜树碱药源匮乏、满足医药工业大规模工厂化生产需要具有重要意义。

主权项

一种采用转喜树aoc基因提高喜树愈伤组织中喜树碱含量的方法，其特征在于，从喜树中克隆丙二烯氧化物环化酶AOC基因，构建含aoc基因的植物表达载体，用根癌农杆菌介导，将aoc基因导入喜树幼胚并诱导出愈伤组织，PCR和半定量RT-PCR检测外源目的基因aoc的整合和表达情况，利用高效液相色谱法测定喜树愈伤组织中喜树碱的含量，筛选喜树碱含量提高的转基因喜树愈伤组织。