一种4-氨基二苯甲酮人工抗原的制备方法

摘要

一种4-氨基二苯甲酮人工抗原的制备方法，属于生物化工技术领域。由于二苯甲酮没有偶联必须的基团，所以采用4-氨基二苯甲酮作为半抗原，两者具有相同的母体，本发明利用二苯甲酮的类似物4-氨基二苯甲酮，制备4-氨基二苯甲酮人工抗原。本发明以4-氨基二苯甲酮为半抗原，用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了4-氨基二苯甲酮的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对二苯甲酮和4-氨基二苯甲酮研究的需要。

主权项

一种4-氨基二苯甲酮人工抗原的制备方法，其特征在于以4-氨基二苯甲酮为半抗原，用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光广度法测定偶联物的偶联比；(1)人工抗原的合成：A液：取0.1mmol 4-氨基二苯甲酮溶于6mL N，N-二甲基甲酰胺，冰浴，加入1mL 2mol/L HCl，再加13mL水，冰浴，滴加质量浓度1％NaNO2溶液，冰浴中持续搅拌，NaNO2溶液的加入量用淀粉-碘化物试纸进行监控，试纸变成蓝黑色以后，4℃下搅拌孵育15分钟为A液；B液：牛血清白蛋白BSA 0.002mmol溶于0.05mol/L、pH 9.6的碳酸盐CBS缓冲液中，为B液，4℃保存待用；将A液逐滴加入B液中，调pH 9.0然后置4℃下孵育半小时，室温反应4小时，即得4-氨基二苯甲酮人工抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将4-氨基二苯甲酮人工抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天，最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到4-氨基二苯甲酮人工抗原；(2)人工抗原的鉴定：4-氨基二苯甲酮人工抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。