一种糖尿病食疗酵母及其构建方法

摘要

本发明描述了一种糖尿病食疗酵母及其构建方法。该重组酵母是以酿酒酵母基因组DNA为模板扩增两段rDNA序列；以pYX212为模板扩增营养标记基因URA3和磷酸丙糖异构酶启动子驱动的表达盒片段；将四个扩增产物分别克隆到pUC18的相应位点，得到整合型载体pNK1。再利用DNA合成点突变技术除去天然GLP-1分子中的二肽酶VI和胰蛋白酶的酶切位点，合成I、II型和左右连接补平引物片段，用分步退火一步连接法获得十拷贝串联rolGLP-1序列并将之克隆到pNK1中得到pNK-GLP。然后线性化pNK-GLP并转化酿酒酵母BJ2407，筛选得到重组酵母SG2。因rolGLP-1基因整合于酵母染色体中，该重组菌株具有稳定高效表达rolGLP-1的特性和降低高血糖大鼠血糖水平的功能，可用于开发治疗糖尿病的酵母生物药物。

主权项

1.一种重组酿酒酵母，是将一种治疗糖尿病的多肽——长效胰高血糖样肽-1(rolGLP-1)的编码基因以同向串联方式导入到酿酒酵母BJ2407中，得到稳定表达rolGLP-1的菌株；所述串联rolGLP-1基因的编码DNA碱基序列为：编码的氨基酸序列通式为：[His-Ser-Glu-Gly-Thr-Phe-The-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Gln-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Asp-Gly-Arg]_n，n＝1-10。