分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法

摘要

本发明涉及一种分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法，通过应用藻胆蛋白α亚基裂合/异构酶催化藻红胆素异构为藻尿胆素后与链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白α亚基类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的结合藻尿胆素PUB的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质，本发明的方法应用生物过程生产链霉亲和素标记的结合PUB的藻红蓝蛋白类α亚基荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法，链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质能应用于生物学和医药功能材料领域，特别是应用为生物学和医学检测领域的荧光探针。

主权项

一种分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)采用基因工程方法，将α亚基裂合酶基因或其同源基因克隆于表达载体中，得到α亚基裂合/异构酶表达质粒；应用基因工程方法将链霉亲和素基因和藻红蓝蛋白α亚基类脱辅基蛋白基因或其同源基因克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；应用基因工程方法将藻红胆素PEB生物合成酶基因或其同源基因克隆于第三个和/或第四个表达载体中，得到PEB合成质粒；(2)将α裂合/异构酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、PEB生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程能生产链霉亲和素标记的结合藻尿胆素PUB的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质，发酵后，按常规蛋白质提纯技术，可提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻尿胆素PUB的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质。