快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法

摘要

本发明公开了快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，本发明采用离子交换法去除大量杂质，结合双氧水氧化法，大大提高肝素钠的色泽、效价，再用酒精快速沉淀法分离肝素钠中的多硫酸软骨素，保证肝素钠的收率达到85％以上，效价在180u/mg以上，各项指标完全符合USP、EP标准。本发明比报道的丙酮萃取法效果更加显著，因为多硫酸软骨素与肝素钠同属多糖类物质，对乙醇、丙酮等有机溶剂的溶解性非常低，因此有机溶剂萃取法分离效果不好，特别是肝素钠中多硫酸软骨素较高时分离效果更不明显。而快速沉淀法是根据多硫酸软骨素绝对分子量比肝素钠大、结构上又有差异等特点设计的，本发明操作简单、分离效果显著。

主权项

快速沉淀分离肝素钠中多硫酸软骨素的方法，其特征在于包括下列步骤：(1)溶解：在搅拌状态下，将粗品肝素钠加入反应釜内的水中，升温至55℃±5℃，搅拌4-6小时，使肝素钠完全溶解；(2)过滤：过滤，收集滤液。(3)树脂吸附：将滤液泵入处理好的吸附柱，流出的液体循环泵入吸附；(4)清洗：待流出液效价检测恒定后，停止吸附；用水清洗干净树脂；再用3-5倍树脂体积的1.0-1.5mol/L盐水清洗树脂；(5)洗脱：配制2-3倍树脂体积的3-4mol/L盐水洗脱树脂，收集洗脱液；(6)一次醇沉：将洗脱液泵入醇沉罐，按体积的1-1.5倍加入重量浓度为95％、或95％以上的酒精，搅拌半小时，静置12小时，收集肝素钠沉淀；(7)氧化：将肝素钠沉淀按10000-20000IU/L溶解于0.5-0.7mol/L氯化钠溶液中，用碱调PH10-12，再按体积的2-3％加入双氧水，在30-40℃下，氧化8-12小时；(8)快速沉淀：氧化结束后，降温至10-20℃，将PH调至5-6，澄清过滤，收集滤液；搅拌下缓慢加入酒精至溶液中酒精的重量浓度为30-38％，再搅拌30分钟，静置；用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，收集沉淀；再静置，用搅拌棒试探罐底，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精转移至另一沉淀罐，再收集沉淀物；如此重复，直至连续静止4小时罐底没有沉淀，再向溶液中补加酒精至溶液中酒精的重量浓度为45-50％，静止沉淀10-12小时，将肝素钠完全沉淀；分别将每次收集的沉淀物送检测，不含多硫酸软骨素的沉淀物合并后进入下一工序；(9)脱水烘干：将步骤(8)的沉淀物加入酒精中，搅拌捣碎，溶液中的酒精重量浓度在85％以上，静止12小时，真空抽滤，得到的固体物在70-80℃真空干燥，即得到不含多硫酸软骨素的肝素钠。