野生桑黄蘑菇菌株的分离培养方法

摘要

本发明涉及药用真菌的菌种分离培养技术领域，具体涉及野生桑黄蘑菇菌株分离培养方法。本发明要克服现有技术存在的菌丝体发酵产量低的问题，提供的技术方案包括以下步骤：(1)按下述配方和配比制作试管斜面培养基，培养基的配方：马铃薯220～260g、葡萄糖18～25g、磷酸二氢钾0.8～1.2g、硫酸镁0.4～0.6g、维生素B 18～12mg、桑树枝80～100g、琼脂18～20g、水1000ml，pH6～7.0；(2)分离培养：①桑黄子实体处理；②桑黄菌分离；③母种培养。利用本发明的方法可有效促进菌丝生长发育，提高菌株的活性，最终实现了桑黄菌液体发酵生产的菌丝体产量高，平均可达到8.83g干菌丝体/1000ml以上。

主权项

中国野生桑黄蘑菇菌株的分离培养方法，包括以下步骤：(1)培养基的制作：按下述配方和配比制作试管斜面培养基培养基的配方：马铃薯220～260g、葡萄糖18～25g、磷酸二氢钾0.8～1.2g、硫酸镁0.4～0.6g、维生素B18～12mg、桑树枝80～100g、琼脂18～20g、水1000mL，pH6～7.0：培养基的制作方法：先将桑树枝剪成1～2cm的小段，加1200～1800mL水煮沸30～40分钟，过滤取汁；然后将马铃薯去皮、切1cm左右厚片，加入此汁中煮沸10～20分钟，过滤取滤液；在此滤液中按配比量加入葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL；将已制备好的培养基趁热分装于试管内，每支10mL，用棉塞塞紧试管口，按每10支管为一捆，用防潮纸包紧有棉塞的一端，放入高压灭菌锅内灭菌，压力1.0～1.5kg/cm2，温度121～126℃，时间30分钟，取出试管摆斜面，凝固后为母种培养基；(2)分离培养：①桑黄子实体处理：取桑黄子实体，用干净刷子刷去菇体表面的杂质，用75％酒精擦洗固体外表面数次，再在0.5％甲硝唑溶液里浸泡5～10分钟进行消毒，然后置于无菌烧杯中备用；②桑黄菌分离：将已处理消毒好的子实体在超净工作台上撕开，用已灭菌的解剖刀在菌片中央切取米粒大的组织1块，放入试管斜面培养基表面；③母种培养：试管置于25～28℃恒温箱中，待长成菌丝后，取生长快、菌 丝长的菌丝块移入另一无菌试管斜面培养基表面培养，待长出菌丝后，取生长快、无杂菌污染的菌丝块再次移入另一斜面培养基表面，25～28℃培养12d、菌丝长满斜面且无杂菌，即为桑黄菌母种。