LRRC4基因启动子区甲基化检测在脑胶质瘤诊断中的应用及其检测系统

摘要

本发明公开了LRRC4基因启动子区甲基化检测在脑胶质瘤诊断中的应用及其检测系统，脑组织特异性表达基因LRRC4是脑胶质瘤特异性甲基化异化基因，因此提示LRRC4基因启动子区甲基化检测可应用于胶质瘤的早期诊断，并制备出LRRC4基因启动子区甲基化检测系统，包括DNA亚硫酸氢盐修饰试剂盒和LRRC4启动子区甲基化特异性PCR扩增试剂盒。本发明检测系统检测血浆LRRC4启动子区甲基化状态的特异性可达92％，灵敏度高，可以定量检测各人群血浆LRRC4启动子区甲基化状态，从而对脑胶质瘤患者做出早期、快速的无创性诊断。

主权项

一种LRRC4基因启动子区甲基化检测系统，其特征在于：包括DNA亚硫酸氢盐修饰试剂盒和LRRC4启动子区甲基化特异性PCR扩增试剂盒；所述DNA亚硫酸氢盐修饰试剂盒包括A液--3M NaOH，B液--10mM对苯二酚，C液--3.6MpH值为5.0的亚硫酸氢钠，D液2M NaOH，E液10M醋酸胺以及硅胶纯化柱；所述LRRC4启动子区甲基化特异性PCR扩增试剂盒包括一对甲基化引物：5’-AGCGTAGTATTTAGCGAGTGC-3’(F)5’-TAAACCCTAACACCGACTC G-3’(R)；和一对非甲基化引物：5’-GGGAGTGTAGTATTTAGTGAGTGT-3’(F)5’-TAAACCCTAACACCAACTCACTC-3’(R)；以及作为甲基化对照的经亚硫酸氢盐修饰SssI甲基化转移酶处理后的gDNA；作为非甲基化对照的经亚硫酸氢盐修饰正常血gDNA和dNTP、DNA聚合酶和缓冲液。