| 主权项 |
1.一种重组病毒细胞膜，包括一双脂质层，该双脂质层包含一病毒的一融合蛋白、一两性佐剂以及可另包含一抗原，该两性佐剂为一脂肽，其中：a).该双脂质层包含一脂质组成物，其适于使该病毒之细胞膜与一细胞之细胞膜进行由该融合蛋白所引发的融合作用，该细胞可与衍生出该融合蛋白之病毒融合；b).该融合蛋白及该两性佐剂与该双脂质层的疏水内部交互作用；以及c).该融合蛋白、该两性佐剂及可另包含的该抗原为非共价连接。 ;2.如申请专利范围第1项所述之重组病毒细胞膜，其中该双脂质层包含一病毒之细胞膜的天然脂质。 ;3.如申请专利范围第1项或第2项所述之重组病毒细胞膜，其中该两性佐剂为一种哺乳类的类铎受体(TLR)的配体。 ;4.如申请专利范围第1项所述之重组病毒细胞膜，其中该脂肽为以下成份所构成之群组：N-棕榈醯-S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-丝胺酸、S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-丝胺酸、N-棕榈醯-S-2,3(双棕榈醯氧醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、N-棕榈醯-S-2,3(双油醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、S-2,3(双油醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、N-棕榈醯-S-2,3(双肉荳蔻醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、S-2,3(双肉荳蔻醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、N-棕榈醯-S-3(棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、N-棕榈醯-S-2,3羟基-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(离胺醯基)3-离胺酸、N-棕榈醯-S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(脯胺醯基)3-脯胺酸、N-棕榈醯-S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(麸醯胺醯基)3-麸胺酸。 ;5.如申请专利范围第1项或第2项所述之重组病毒细胞膜，其中该抗原为一种插入性膜蛋白(integral membrane protein)。 ;6.如申请专利范围第1项或第2项所述之重组病毒细胞膜，其中该抗原为一种病毒抗原。 ;7.如申请专利范围第6项所述之重组病毒细胞膜，其中该抗原来自一种流行性感冒病毒。 ;8.如申请专利范围第7项所述之重组病毒细胞膜，其中该抗原是一种血球凝集素(HA)、一种神经胺酸酶或一种M2蛋白。 ;9.如申请专利范围第6项所述之重组病毒细胞膜，其中该抗原衍生自一种病毒，而该种病毒是选自于由反转录病毒、风疹病毒、黄病毒、副黏液病毒、疱疹病毒、布尼亚病毒、沙状病毒、汉他病毒、冠状病毒科、乳多瘤病毒科、杆状病毒科、阿尔病毒科(Alphaviridae)、披衣病毒科、线病毒科、痘病毒科以及非洲猪瘟病毒所组成的群组。 ;10.如申请专利范围第1项或第2项所述之重组病毒细胞膜，其中该抗原由一种寄生虫、细菌、蕈、酵母菌所引发，或该抗原为一种肿瘤特异性抗原。 ;11.一种制造重组病毒细胞膜的方法，其中该方法包括以下步骤：a).将一种两性佐剂、一种病毒融合蛋白、或再加一种抗原，以及脂质混合于包含一种清涤剂的一溶液中，其中该两性佐剂为一脂肽；b).在容许包含一双脂质层的一病毒细胞膜重组的条件下减少该清涤剂的浓度，而该双脂质层的疏水内部与该两性佐剂及该病毒融合蛋白相互作用，其中该两性佐剂及该病毒融合蛋白为非共价连接，且该两性佐剂及可以选择再加入之该抗原亦为非共价连接，另外该重组病毒细胞膜具有膜融合作用；c).另外，可选择将该重组病毒细胞膜纯化；以及d).另外，可选择将该重组病毒细胞膜调配并入一种药剂组合。 ;12.一种药剂组合，包含一种如申请专利范围第1项到第10项中之任何一项所述之重组病毒细胞膜以及一种药理上可接受之载体。 ;13.如申请专利范围第12项所述之药剂组合，其中该组合适合作为鼻剂、口服剂或非经肠的用剂。;图1系为蔗糖梯度解释图，用以分析在含佐剂的重组病毒细胞膜之脂肽、蛋白及脂质间之物理缔合。;图2系为平面薄层色层分析谱，用于说明脂质及脂肽出自10到40%在图1中所述之成份上的蔗糖介面。其中A段为控制段，呈现具宁海准反应的天然病毒脂质，而该重组病毒细胞膜不含脂肽；B段中之重组病毒细胞膜包含脂肽，呈现该天然病毒脂质与宁海准之反应，且另加具宁海准反应的脂肽。该色层分析谱以平面发展：系统1氯仿/甲醇/水65/25/4，系统2N-丁醇/醋酸/水2/1/1，以及以含宁海准染料之衍生作用着色。样品区以点作标记。;图3系为本发明中包含脂肽的重组病毒细胞膜之电子显微照片，以铵磷钼酸盐作阴性着色。其中的细胞膜直径约为100到200奈米。;图4显示在使用过两剂含A/Panama/2007/99的鼻用疫苗后(两剂前后相隔十四天)，鼻腔及肺部中的IgA浓度；该浓度是在用过最后一剂的三周后测得的，其中，先前的疫苗浓度已扣除。在本发明中所使用的疫苗为包含脂肽的标准商用次单元疫苗，测试群组为10只白鼠。;图5显示在使用过两剂鼻用疫苗后于血液中IgG浓度(两剂前后相隔十四天)，该浓度是在用过最后一剂的三周后测得的，其中，先前的疫苗浓度已扣除。该疫苗是使用根据EP0538437专利案所备制的Virosomes，或使用重组病毒细胞膜，且为本发明中所述含脂肽者。四种不同的疫苗制剂，如图所示，每一种都含有取自病毒的一片段之抗原，并测试于四组各10只白鼠。;图6显示本发明之重组病毒细胞膜的融合作用，该重组病毒细胞膜包含与红血球血影混合的芘-磷脂，并根据说明量测其融合度。;图7显示在使用过一剂鼻用疫苗后于血液中IgG浓度，该浓度是在用剂过的三周后测得的，其中，先前的疫苗浓度已扣除。该疫苗是使用根据EP0538437专利案所备制的Virosomes，或使用重组病毒细胞膜，且为本发明中所述含脂肽者，测试群组为10只白鼠。;图8系为自A/W系病毒之重组病毒细胞膜的均衡密度蔗糖梯度分析，显示重组物质的单一密度高峰，而脂肽系取自4，5及6的部份。;图9显示在尚未使用鼻用疫苗及使用过剂鼻用疫苗十四天后于血液中IgG浓度，测试群组为10只白鼠。其中，抗原系取自病毒的A/Panama/2007/99段，该细胞膜包含N-棕榈醯-S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(脯胺醯基)3-脯胺酸。;图10显示在使用过两剂含A/Panama/2007/99种之重组组胞膜的鼻用疫苗后，鼻腔及肺部中的IgA浓度；测试群组为10只白鼠。其中该疫苗含脂肽N-棕榈醯-S-2,3(双棕榈醯氧)-丙基-半胱胺醯基-丝胺醯基-(脯胺醯基)3-脯胺酸，两剂前后相隔十四天，该浓度是在用过最后一剂的三周后测得的，其中，先前的疫苗浓度已扣除。 |
