溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法。溶葡萄球菌酶的制备方法主要包括：设计并合成优化的溶葡萄球菌酶基因，构建表达载体后转化大肠杆菌工程菌，筛选高表达菌株，发酵培养工程菌，表达产物分离纯化。其中所述的表达载体质粒是pET系列载体质粒。本发明的方法，表达方案简单，表达量高，纯化工艺简单，收率高，表达产物可溶，不需要复性，直接用层析方法进行纯化，纯化收率大大提高，适合大规模制备。本发明公开的溶葡萄球菌酶衍生物由PEG修饰后免疫原性降低，半衰期延长，适合临床应用于葡萄球菌感染的治疗。

主权项

溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于包括以下的步骤：(1)、溶葡萄球菌酶基因的设计与合成，溶葡萄球菌酶基因序列如SEQ IDNO.1所述；(2)、表达载体的构建及转化大肠杆菌工程菌：将溶葡萄球菌酶基因片段插入到表达载体质粒的酶切位点，然后直接转化大肠杆菌宿主菌，其中所述的表达载体质粒是pET-22b；(3)、阳性克隆的筛选、培养、诱导表达：筛选出阳性克隆在培养基上进行培养，经诱导使目标蛋白表达；(4)、表达产物的分离、纯化：将大肠杆菌工程菌菌体收集、破菌，经离心得到破菌液上清，然后对破菌液上清用层析技术纯化。